Factor for fibroblast colony forming unit

Details Factor for fibroblast colony forming unit Factor for fibroblast colony forming unit

C - Chemistry, Metallurgy

12

P

C12P 21/00 (2006.01) C07K 14/475 (2006.01)

Patent

CA 2169945

A colony forming unit fibroblast (CFU-F) factor has been identified having the following characteristics: (a) it is a polypeptide present in P388 or 416B (ECACC provisional accession no. 94082401) cells and capable of extraction from the cell lysate or conditioned medium; (b) when added to explanted bone marrow adherent cells which are below the level capable of forming fibroblast colonies, it is capable of inducing the formation of fibroblast colonies; (c) it binds heparin-agarose at physiological pH; (d) the heparin binding fraction, when subjected to reducing SDS-PAGE, produces bands at about (12, 15, 16 and 17kD); (e) its activity is not affected by heating at 100 °C for 10 minutes; (f) it can be purified from the cell lysate by fractionation by anion-exchange chromatography, eluting at 0.3M sodium chloride; followed by size exclusion chromatography, optionally followed by further purification such as HPLC and/or SDS-PAGE.

Un facteur d'une unité de formation de colonies de fibroblastes a été identifié et présente les caractéristiques suivantes: (a) c'est un polypeptide présent dans les cellules P388 ou 416B (numéro provisoire de l'ECACC : 94082401) et qui peut être extrait du lysat cellulaire ou d'un milieu conditionné; (b) lorsque ce polypeptide est ajouté à des cellules d'adhésion de moelle osseuse explantée qui se trouvent au-dessous du niveau apte à former des colonies de fibroblastes, il peut induire la formation de colonies de fibroblastes; (c) il fixe l'héparine-agarose à un niveau de pH physiologique; (d) la fraction de liaison de l'héparine, lorsqu'elle est soumise au procédé de réduction PAGE en présence de SDS, produit des bandes sur environ 12, 15, 16 et 17 kD; (e) son activité n'est pas affectée lorsqu'on le chauffe à 100 DEG C pendant 10 minutes; (f) il peut être purifié à partir du lysat cellulaire par fractionnement par chromatographie d'échange d'anions, par élution à un niveau de chlorure de sodium de 0,3M; puis par chromatographie sur gel, et éventuellement par une autre purification telle que HPLC et/ou PAGE en présence de SDS.

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