C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 5/02 (2006.01) C12M 3/00 (2006.01) C12M 3/04 (2006.01)
Patent
CA 2162465
The invention is a flow-through bioreactor for the retention and culture of cells in perfused media. The bioreactor is a generally rectangular vessel with inlet and outlet ports in the lid allowing for media flow along the longitudinal axis of the vessel. The inner surface of the bottom wall of the bioreactor has a plurality of generally rectangular grooves having a length, a depth, and a width. The grooves are positioned in the bottom wall such that their length is transverse to the longitudinal axis of the vessel, allowing media flow across the width of the grooves. Cells settle into the grooves, where they proliferate and differentiate, without entering the bulk flow of media through the vessel, thus avoiding loss of cells due to media flow. The invention also provides a method for the perfusion culture of hematopoietic cells whereby a suspension of either unselected hematopoietic mononuclear cells or CD34+ selected cells is placed in the bioreactor and cultured without loss of non-adherent stem/progenitor cells. Various cytokines can be added to the culture medium such that the cells in the grooves form colony-forming units (CFU-GM, BFU-E, CFU-Mix), long-term culture initiating cells (LTC-IC), and granulocytic precursors (blast cells, promyelocytes, myelocytes, metamyelocytes).
L'invention concerne un bioréacteur à écoulement continu destiné à recevoir et à mettre en culture des cellules dans un milieu perfusé. Le bioréacteur est un récipient généralement rectangulaire avec des orifices d'entrée et de sortie dans le couvercle, permettant au milieu de circuler le long de l'axe longitudinal du récipient. La surface interne de la paroi inférieure du bioréacteur présente une pluralité de rainures de forme générale rectangulaire, d'une certaine longueur, largeur et profondeur. Les rainures sont agencées dans la paroi inférieure pour que leur longueur soit perpendiculaire à l'axe longitudinal du récipient, ce qui assure une circulation du milieu dans le sens de la largeur des rainures. Les cellules se déposent dans les rainures et elles y prolifèrent et se différencient, sans entrer dans l'écoulement global du milieu traversant le récipient, ce qui évite des pertes de cellules par entraînement. L'invention concerne également un procédé de culture en perfusion de cellules hématopoïétiques, dans lequel une suspension de cellules hématopoïétiques mononucléaires non sélectionnées ou de cellules CD34+ sélectionnées est placée dans le bioréacteur et mise en culture sans perte de cellules souches n'adhérant pas. On peut ajouter différentes cytokines au milieu de culture pour que les cellules forment dans les rainures différentes unités formant des colonies (granulocytes-macrophages, érythroblastes à formation en salves, populations mixtes), des cellules capables d'amorcer une culture de longue durée et des précurseurs de granulocytes (cellules blastiques, promyélocytes, myélocytes, métamyélocytes).
Bender James G.
Miller William M.
Papoutsakis E. T.
Sandstrom Craig
Nexell Therapeutics Inc.
Northwestern University
Sim & Mcburney
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1599498