Fluorescence indicator utilizing fret

G - Physics – 01 – N

Patent

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G01N 33/68 (2006.01) C07K 14/435 (2006.01) C07K 19/00 (2006.01) C12N 1/15 (2006.01) C12N 1/19 (2006.01) C12N 1/21 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 15/11 (2006.01) C12Q 1/02 (2006.01) G01N 33/483 (2006.01) G01N 33/84 (2006.01)

Patent

CA 2542860

A novel fluorescence indicator for analyzing an intermolecular interaction or intramolecular structural change with the use of fluorescence resonance energy transfer (FRET). There is provided a fluorescence indicator having such a structure that a donor fluorescent protein and an acceptor fluorescent protein are linked to both ends of a target sequence for analyte wherein the three- dimensional structure of the indicator is changed by analyte liking to the target sequence or action on the target sequence to thereby induce fluorescence resonance energy transfer (FRET), characterized in that the donor fluorescent protein and/or acceptor fluorescent protein is a circular permutation variant fluorescent protein obtained by interchanging between N- terminus side amino acid sequence and C-terminus side amino acid sequence of wild type fluorescent protein or its variant protein and is a fluorescent protein having substantially the same fluorescence peak wavelength as that of the fluorescent protein before being subjected to the circular permutation variation.

L'invention concerne un nouvel indicateur de fluorescence servant à analyser une interaction intermoléculaire ou un changement structural intramoléculaire, par transfert d'énergie par résonance de fluorescence (FRET). La présente invention se rapporte à un indicateur de fluorescence présentant une structure qui permet de relier une protéine fluorescente donneuse et une protéine fluorescente receveuse aux deux extrémités d'une séquence cible pour un analyte, la structure tridimensionnelle de l'indicateur étant modifiée par liaison de l'analyte avec la séquence cible ou action de l'analyte sur la séquence cible, pour induire un transfert d'énergie par résonance de fluorescence (FRET). Cette invention est caractérisée en ce que la protéine fluorescente donneuse et/ou la protéine fluorescente receveuse est une protéine fluorescente variable par permutation circulaire, qui est obtenue par translocation réciproque d'une séquence d'acides aminés côté N-terminal et d'une séquence d'acides aminés côté C-terminal de la protéine fluorescente de type sauvage ou d'une variante, et est en outre une protéine fluorescente qui présente la même longueur d'onde de crête de fluorescence que celle d'une protéine fluorescente avant d'avoir subi une variation par permutation circulaire.

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