C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/53 (2006.01) C12N 1/19 (2006.01) C12N 9/02 (2006.01) C12N 15/81 (2006.01) C12Q 1/26 (2006.01)
Patent
CA 2331765
The present invention provides formaldehyde dehydrogenase genes (FLD) from methylotrophic yeasts. The FLD structural genes confer resistance to formaldehyde and are therefore useful as a selectable marker in methylotrophic yeasts. The FLD promoter sequences are strongly and independently induced by either methanol as sole carbon source (with ammonium sulfate as nitrogen source) or methylamine as sole nitrogen source (with glucose as carbon source). Induction under either methanol, methylamine or both provides levels of heterologous gene expression comparable to those obtained with the commonly used alcohol oxidase I gene promoter (PAOX1). The FLD promoter of Pichia pastoris (PFLD1) is an attractive alternative to PAOX1 for expression of foreign genes in P. pastoris, allowing regulation by carbon (methanol) or nitrogen (methylamine) source within the same expression strain. Yeast strains, expression cassettes, expression vectors, and host cells comprising an FLD gene promoter and 3' termination sequence are also provided.
La présente invention concerne l'obtention de gènes de formaldéhyde déshydrogénase (FLD) à partir de levures méthylotrophes. Les gènes de structure FLD confèrent une résistance à la formaldéhyde et sont donc utiles comme marqueur sélectionnable dans les levures méthylotrophes. Les séquences de promoteur FLD sont fortement et indépendamment induites ou bien par le méthanol utilisé comme source unique de carbone (avec du sulfate d'ammonium comme source d'azote) ou par la méthylamine utilisée comme source unique d'azote (avec du glucose comme source de carbone). Une induction avec ou bien du méthanol, de la méthylamine ou les deux donne des niveaux d'expression de gène hétérologue comparables à ceux obtenus avec le promoteur de gène d'alcool oxydase I (P¿AOX1?) communément utilisé. Le promoteur FLD de Pichia pastoris (P¿FLD1?) représente une alternative intéressante à P¿AOX1? pour l'expression de gènes étrangers dans P. pastoris, en permettant la régulation par une source de carbone (méthanol) ou d'azote (méthylamine) pour la même souche d'expression. L'invention concerne aussi des souches de levures, des cassettes d'expression, des vecteurs d'expression, et des cellules hôtes qui comprennent un promoteur de gène FLD et une séquence terminale 3'.
Mcfadden Fincham
Research Corporation Technologies Inc.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-2042833