C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/12 (2006.01) C07K 14/705 (2006.01) C12N 15/63 (2006.01) C12N 15/85 (2006.01) G01N 33/50 (2006.01) G01N 33/94 (2006.01)
Patent
CA 2569916
In a first aspect the present invention provides an inducible expression vector encoding a metabotropic glutamate receptor. In particular a tetracycline inducible expression vector such as for example the commercially available pcDNA4/TO mammalian expression vector (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) comprising the nucleotide sequence encoding for a member of the Group I mGluRs, in particular for the human mGluRla (SEQ ID Nol) or mGluR5 receptor (SEQ ID No.3). In a more preferred embodiment the inducible expression vector is selected from the tetracycline inducible expression plasmids hmGlula- pcDNA4/TO (Figure 4) and hmGlu5a-pcDNA4/TO (Figure 5). In a second aspect, the present invention provides a cell line comprising any of the aforementioned inducible expression vectors. In particular the T-Rex~293 cells stably transfected with the tetracycline inducible expression plasmids hmGlula- pcDNA4/TO (Figure 4) and hmGlu5a-pcDNA4/TO (Figure 5) which where deposited at the Belgian Coordinated Collections of Microorganisms (BCCM) as T-Rex-293- hmGlu I a-pcDNA4/TO clone on June 24, 2004. In a third aspect the present invention provides a method to identify compounds capability to modulate the activity of a metabotropic glutamate receptor said method comprising the steps of; contacting the aforementioned cell line with the compound to be tested , and determining the effect of said test compound on the metabotropic glutamate receptor activity. The effect on the metabotropic glutamate receptor activity is typically determined by assessing the change in intracellular calcium, in particular using a fluorescent dye such as for example fluo-3-AM. It is also an object of the present invention to provide a method to identify a compound capable to interact with a metabotrobic glutamate receptor, in particular with a Group I mGluR receptor, said method comprising the steps of contacting the cells according to the invention with the compounds to be tested under appropriate conditions and determining the binding of said test compounds to the cells.
Un premier aspect de cette invention concerne un vecteur d'expression inductible codant pour un récepteur métabotropique du glutamate. Plus particulièrement, un vecteur d'expression inductible de la tétracycline, tel que par exemple, le vecteur d'expression mammifère disponible dans le commerce pcDNA4/TO (Invitrogen, Carlsbad, CA, Etats-Unis d'Amérique), comprenant la séquence nucléotide codant pour un membre des récepteurs mGluRs du Groupe I, en particulier pour le récepteur humain mGluRla (SEQ ID No 1) ou le récepteur mGluR5 (SEQ ID No.3). dans un mode de réalisation privilégié, le vecteur d'expression inductible est sélectionné dans le groupe comprenant les plasmides d'expression inductibles de la tétracycline hmGlula-pcDNA4/TO (Figure 4) et hmGlu5a-pcDNA4/TO (Figure 5). Un autre aspect de cette invention concerne une lignée cellulaire comprenant l'un ou l'autre des vecteurs d'expression inductibles susmentionnés. Plus particulièrement, les cellules T-Rex-293 transfectées de manière stable au moyen des plasmides d'expression inductibles de la tétracycline hmGlula-pcDNA4/TO (Figure 4) et hmGlu5a-pcDNA4/TO (Figure 5) lesquelles ont été déposées au Belgian Coordinated Collections of Microorganisms (BCCM) en tant que clone T-Rex-293-hmGlu I a-pcDNA4/TO le 24 juin 2004. Un troisième aspect de cette invention concerne un procédé permettant d'identifier la capacité des composés à moduler l'activité d'un récepteur métabotropique du glutamate, lequel procédé comprend les étapes qui consistent à mettre en contact la lignée cellulaire susmentionnée avec le composé devant être testé; puis à déterminer l'effet dudit composé test sur l'activité du récepteur métabotropique du glutamate. L'effet de l'activité du récepteur métabotropique du glutamate est typiquement déterminé par évaluation de la modification du calcium intracellulaire, en particulier au moyen d'un colorant fluorescent, tel que, par exemple, le fluo-3-AM. Cette invention concerne également un procédé permettant d'identifier un composé capable d'interagir avec un récepteur métabotropique du glutamate, plus particulièrement, avec un récepteur mGluR du groupe I; ce procédé comprend les étapes qui consistent à mettre en contact les cellules décrites dans l'invention avec des composés devant être testés dans des conditions appropriées, puis à déterminer la liaison de ces composés testés aux cellules.
Gowling Lafleur Henderson Llp
Janssen Pharmaceutica N.v.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-2080876