Fungal beta-tubulin genes

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

Patent

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Details

C12N 15/31 (2006.01) C07K 14/37 (2006.01) C12Q 1/04 (2006.01) G01N 33/569 (2006.01)

Patent

CA 2367471

The anticancer drug taxol binds to beta-tubulin in assembled microtubules (MT) and causes cell cycle arrest in animal cells; in contrast, the effect of taxol varies in fungi. For instance, the taxol-producer Pestalotiopsis microspora Ne32, an ascomycete, is resistant to taxol (1C50~11.7 M), whereas Pythium ultimum and Phytophthora cinnamomi, two oomycetes, are sensitive to taxol (IC50 0.1 µM). cDNAs encoding beta-tubulin from P.microspora, P. ultimum, and P. cinnamomi were isolated. The deduced amino acid sequences of beta- tubulin from P. microspora, P.ultimum, and P. cinnamomi can be used in (1) binding assays for the detection of taxol and taxol-like substances; (2) diagnostic assays for the pharmacologic efficacy of taxol against a tumor sample; (3) designing drugs with taxol-like activity via application of information regarding the effect of specific residues on taxol binding; and (4) detection of taxol and taxol-like activity via use of taxol-sensitive and taxol-resistant isogenic strains of P.ultimum constructed by substitution of residues necessary for taxol binding.

Le Taxol médicament utilisé contre le cancer se lie à la bêta-tubuline dans des microtubules (MT) assemblés et provoque l'arrêt du cycle cellulaire dans des cellules animales alors que l'effet du Taxol varie dans des champignons. Par exemple le Pestalotiopsis microspora Ne32 producteur de Taxol est un ascomycète qui résiste au Taxol (IC¿50?~11,7 M), alors que Pythium ultimum et Phytophthora cinnamomi, qui sont deux oomycètes, sont sensibles au Taxol (IC¿50? 0,1 µM). Des ADNc codant de la bêta-tubuline provenant de P.microspora, de P.ultimun et de P.cinnamomi ont été isolés. Les séquences d'acides aminés déduites de bêta-tubuline provenant de P.microspora, P.ultimum et P.cinnamomi peuvent être utilisées dans (1) des dosages de liaison utilisés pour détecter le Taxol et les substances du type Taxol ; (2) des dosages de diagnostic utilisés pour déterminer l'efficacité pharmacologique du Taxol sur un échantillon de tumeur; (3) préparer de nouveaux médicaments ayant une activité du type Taxol au moyen des informations disponibles concernant l'effet de restes spécifiques sur la liaison du Taxol ; et (4) détecter l'activité du Taxol et des substances du type Taxol au moyen de souches isogéniques de P.ultimum sensibles au Taxol et résistant au Taxol produites par substitution de restes nécessaires à la liaison du Taxol.

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