C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/82 (2006.01) A01H 5/00 (2006.01) C12N 15/32 (2006.01) C12N 15/67 (2006.01)
Patent
CA 2255057
The present invention provides chimeric genes that comprise a first promoter recognized by a DNA-dependent RNA polymerase different from a eukaryotic RNA polymerase II; a DNA region encoding a chimeric RNA which comprises a 5'UTR, an AU-rich heterologous coding sequence, a 3'UTR; and optionally a terminator sequence recognized by said RNA polymerase, wherein the first promoter and the DNA region encoding the chimeric RNA are operably linked such that upon transcription by the RNA polymerase an uncapped RNA species is produced which comprises a first translation enhancing sequence derived from the 5' region of genomic or subgenomic RNA of a positive stranded RNA plant virus; a heterologous RNA coding sequence encoding a polypeptide or protein of interest, preferably from an AT-rich gene; and a second translation enhancing sequence derived from the 3' region of genomic or subgenomic RNA of a positive- stranded RNA plant virus, wherein the uncapped RNA species is capable of being translated in the cytoplasm of a plant cell to produce the protein or polypeptide. Also provided in the invention are plant cells and plants comprising these chimeric genes, integrated in their nuclear DNA, whereby the plant cell produces the RNA polymerases corresponding to the used promoters and terminators. Further the invention provides a process for producing a plant expressing a protein or polypeptide encoded by a heterologous gene which comprises the steps of transforming the nuclear genome of a plant cell with the above-mentioned chimeric genes; and regenerating a transformed plant from the transformed cell.
La présente invention concerne des gènes chimères. Ces gènes comprennent un premier promoteur reconnu par une polymérase d'ARN dépendante de l'ADN, différente d'une polymérase II d'ARN eucaryote. Une zone d'ADN codant un ARN chimère qui comprend un UTR 5' une séquence de codage hétérologue riche en AU, un UTR 3', et éventuellement une séquence de terminaison reconnue par cette polymérase d'ARN. Le premier promoteur et la zone d'ADN codant l'ARN chimère sont liés de manière opérationnelle de telle sorte que lors de la transcription par la polymérase d'ARN, une espèce d'ARN sans addition de chapeau est produite qui comprend une première séquence de stimulation de traduction dérivée de la zone 5' de l'ARN génomique ou sous-génomique d'un virus de plante à ARN à brins positifs; une séquence de codage d'ARN hétérologue codant un polypeptide ou une protéine interressante, de préférence, à partir d'un gène riche en AT et enfin une deuxième séquence de stimulation de la traduction dérivée de la zone 3' de l'ARN génomique ou sous-génomique d'un virus de plant à ARN à brins positifs. Cette espèce d'ARN sans addition de chapeau peut être traduite dans le cytoplasme d'une cellule de plante pour produire la protéine ou le polypeptide. L'invention concerne également des cellules de plantes et des plantes comprenant ces gènes chimères, intégrés dans leur ADN nucléaire, ces cellules produisant ainsi les polymérases d'ARN correspondant aux promoteurs et aux terminateurs utilisés. En outre, l'invention a pour objet un procédé pour produire une plante exprimant une protéine ou un polypeptide codé par un gène hétérologue qui comprend les étapes consistant à transformer le génome nucléaire d'une cellule de plante avec les gènes chimères susmentionnés, et regénérer une plante transformée à partir de la cellule transformée.
Cornelissen Marcus
Gossele Veronique
Meulewaeter Frank
Soetaert Piet
Van Aarssen Roel
Fetherstonhaugh & Co.
Plant Genetic Systems N.v.
LandOfFree
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