C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/86 (2006.01) C07K 14/145 (2006.01) C12N 7/00 (2006.01) C12N 7/02 (2006.01) C12N 15/867 (2006.01) A61K 38/00 (2006.01)
Patent
CA 2164324
The present application discloses retrovirus-derived vectors in which the retroviral envelope glycoprotein has been replaced by the G glycoprotein of vesicular stomatitis virus, and the use of these vectors in the transfer of exogenous genes into the cells of a wide variety of non-mammalian organisms. Also disclosed is a method for the generation of retroviral vectors in high titers, wherein a recombinant, stable host cell line is provided which harbors the retroviral vector of interest without envelope protein. High-titer retroviral vector production is initiated by introducing nucleic acid encoding a functional membrane- associated protein into the cell line. The vectors disclosed in the present application can be concentrated by ultracentrifugation to titers greater than 10 9 cfu/ml which are especially useful in human gene therapy trials, and can also infect cells, such as hamster and fish cells, that are ordinarily resistant to infection with vectors containing the retroviral envelope protein.
La présente invention concerne des vecteurs dérivés de rétrovirus dans lesquels la glycoprotéine d'enveloppe rétrovirale a été remplacée par la glycoprotéine G du virus de la stomatite vésiculaire, ainsi que l'utilisation de ces vecteurs dans le transfert des gènes exogènes dans les cellules d'une grande variété d'organismes non mammifères. On décrit également un procédé de production de vecteurs rétroviraux à titres élevés, procédé selon lequel on utilise une lignée cellulaire hôte, stable, de recombinaison qui abrite le vecteur rétroviral concerné sans la protéine d'enveloppe. On démarre la production des vecteurs rétroviraux à titres élevés en introduisant l'acide nucléique codant une protéine fonctionnelle associée à une membrane dans la lignée cellulaire. Les vecteurs selon la présente invention peuvent être concentrés par ultracentrifugation jusqu'à l'obtention de titres supérieurs à 10<9> cfu/ml qui sont notamment utilisés dans des études thérapeutiques des gènes humains, et peuvent aussi infecter des cellules, telles que les cellules du hamster et du poisson, qui résistent généralement à l'infection par des vecteurs contenant la protéine d'enveloppe rétrovirale.
Burns Jane C.
Friedmann Theodore
Yee Jiing-Kuan
Smart & Biggar
The Regents Of The University Of California
LandOfFree
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