Generation of large genomic dna deletions

Details Generation of large genomic dna deletions Generation of large genomic dna deletions

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 5/10 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12N 15/85 (2006.01) C12N 15/90 (2006.01)

Patent

CA 2218489

The method of the invention provides the use of a replacement-type targeting construct to delete large fragments of genomic DNA by gene targeting. The replacement targeting construct, which may contain a selectable marker, is constructed to contain two regions of sequences which are homologous to the 5' and 3' flanking sequences of the targeted locus. After transfection of the targeting construct into the desired cell line, gene targeted-mediated deletions are identified by selection and further characterized. Examples of suitables loci include MHC Class I and II antigens and immunoglobulin genes, including, for example, variable and constant region of kappa, lambda, or heavy chains.

Le procédé de l'invention consiste à utiliser un produit de recombinaison de ciblage, de type produit de recombinaison de remplacement, afin de supprimer d'importants fragments d'ADN génomique par ciblage de gènes. Ce produit de recombinaison de ciblage, pouvant contenir un marqueur sélectionnable, est constitué de deux régions de séquences qui sont homologues des séquences adjacentes 5' et 3' du locus ciblé. Après transfection du produit de recombinaison de ciblage dans la lignée cellulaire désirée, les délétions induites par le ciblage de gènes sont identifiées par sélection, puis caractérisées. Des antigènes des classes I et II du complexe majeur d'histocompatibilité et des gènes d'immunoglobuline sont des exemples de loci appropriés et comprennent, par exemple, des régions variables et constantes des chaînes kappa, lambda ou lourdes.

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