Generation of libraries of antibodies in yeast and uses thereof

Details Generation of libraries of antibodies in yeast and uses thereof Generation of libraries of antibodies in yeast and uses thereof

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 15/10 (2006.01) C07K 16/00 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)

Patent

CA 2411515

Compositions, kits and methods are provided for generating highly diverse libraries of proteins such as antibodies via homologous recombination in vivo, and screening these libraries against protein, peptide and nucleic acid targets using a two-hybrid method in yeast. The method for screening a library of tester fusion proteins against a target protein or peptide comprises: expressing a library of tester proteins in yeast cells, the tester fusion protein comprising a first polypeptide subunit whose sequence varies within the library, a second polypeptide subunit whose sequence varies within the library independently of the first polypeptide, and a linker peptide which links the first and second polypeptide subunits; expressing one or more target fusion proteins in the yeast cells expressing the tester proteins, each of the target fusion proteins comprising a target peptide or protein; and selecting those yeast cells in which a reporter gene is expressed, the expression of the reporter gene being activated by binding of the tester fusion protein to the target fusion protein.

Compositions, kits et procédés pour générer des bibliothèques hautement diversifiées de protéines telles que les anticorps par le biais de la recombinaison homologue in vivo ainsi que criblage de ces bibliothèques à la recherche de cibles de protéines, peptides et acides nucléiques, et ce au moyen d'un procédé à deux hybrides dans la levure. Le procédé destiné au criblage d'une bibliothèque des protéines de fusion de test à la recherche d'une protéine ou peptide cible comprend ce qui suit: exprimer une bibliothèque de protéines de test dans les cellules de levure, la protéine de fusion de test comprenant une première sous-unité polypeptidique dont la séquence varie à l'intérieur de la bibliothèque indépendamment du premier polypeptide ainsi qu'un peptide de liaison qui relie la première et la deuxième sous-unités de polypeptides; exprimer une ou plusieurs protéines de fusion cibles dans les cellules de la levure exprimant les protéines de test, chacune des protéines de fusion cibles comprenant une protéine ou un peptide cible; et sélectionner celles des cellules de levure dans lesquelles un gène rapporteur est exprimé, l'expression du gène rapporteur étant activée par la liaison de la protéine de fusion de test à la protéine de fusion cible.

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