Generic kinase/phosphatase assay with single readout

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q

Patent

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Details

C12Q 1/42 (2006.01) C12Q 1/48 (2006.01) G01N 33/542 (2006.01)

Patent

CA 2698926

The present invention relates to a generic method for detecting a kinase or phosphatase activity. The method comprises the following steps: incubating a kinase or phosphatase activity sample with a kinase or phosphatase substrate molecule comprising either a fluorophore having a detectable readout or molecule with an aromatic group which serves as a quencher of the fluorophore, incubating the mixture of step a) with a detection entity comprising either a fluorophore or a molecule with an aromatic group and a binding partner, wherein the substrate molecule and the detection entity are capable of binding to the binding partner and the binding of the substrate molecule and the detection entity to the binding partner lead to an altered readout of the fluorophore, and measuring the readout of the fluorophore in the mixture of step b), wherein an altered readout of the fluorophore compared to a blank is indicative for the presence of a kinase or phosphatase activity in the sample.

La présente invention porte sur un procédé générique pour détecter une activité kinase ou phosphatase. Le procédé consiste à : (a) faire incuber un échantillon à activité kinase ou phosphatase avec une molécule de substrat de kinase ou phosphatase comprenant soit un fluorophore à lecture détectable, soit une molécule à groupe aromatique qui sert de désactivateur du luminophore ; (b) faire incuber le mélange de l'étape (a) avec une entité de détection comprenant soit un fluorophore, soit une molécule à groupe aromatique et un partenaire de liaison, la molécule de substrat et l'entité de détection étant aptes à se lier au partenaire de liaison, la liaison de la molécule de substrat et de l'entité de détection au partenaire de liaison conduisant à une lecture modifiée du fluorophore ; et (c) mesurer la lecture du fluorophore dans le mélange de l'étape (b), une lecture modifiée du fluorophore par rapport à un blanc indiquant de la présence d'une activité kinase ou phosphatase dans l'échantillon.

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