C - Chemistry – Metallurgy – 07 – K
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
07
K
C07K 19/00 (2006.01) C12N 1/19 (2006.01) C12N 9/38 (2006.01) C12N 15/62 (2006.01) C12Q 1/02 (2006.01) C12Q 1/34 (2006.01) C12Q 1/54 (2006.01) G01N 33/50 (2006.01) G01N 33/542 (2006.01) G01N 33/68 (2006.01)
Patent
CA 2458879
A system is provided for producing biologically active fusion proteins comprising a sequence encoding an enzyme donor ("ED") sequence of fused in reading frame to a sequence encoding a surrogate of a mammalian protein of interest, where the fusion protein has the function of the natural protein. A vector is provided comprising a transcriptional and translational regulatory region functional in a mammalian host cell, a sequence encoding the ED joined to a multiple cloning site, an enzyme acceptor (EA) protein or enzyme acceptor sequence encoding such protein, that is complemented by the ED to form a functional enzyme, e.g. .beta.-galactosidase, and substrate that is turned over by the enzyme to form a detectable substrate. Mammalian cells are employed that may be modified to provide specific functions, such as expression of the EA, overexpression of a protein of interest, etc. The system is used to monitor the fusion protein as a surrogate for the natural protein.
L'invention concerne un système servant à produire des protéines de fusion biologiquement actives comprenant une séquence codant une séquence donneuse d'enzymes (<= ED >=) fusionnée dans un cadre de lecture à une séquence codant un substitut de protéine mammifère, cette protéine de fusion possédant la fonction de la protéine naturelle. L'invention concerne un vecteur comprenant une zone régulatrice de transcription et de translation fonctionnelle dans une cellule hôte mammifère, une séquence codant le ED relié à un site de clonage multiple, une protéine accepteur d'enzyme (EA) ou une séquence accepteur d'enzyme codant cette protéine, complétée par le ED afin de constituer un enzyme fonctionnel, par exemple, .beta.-galactosidase, et un substrat transformé par l'enzyme de manière à constituer un substrat détectable. On met en application des cellules mammifères pouvant être modifiées afin de remplir des fonctions spécifiques, telles que l'expression de EA ou la surexpression d'une protéine déterminée. On utilise ce système afin de contrôler la protéine de fusion dans son rôle de substitut de la protéine naturelle.
Eglen Richard
Vainshtein Inna
Zhao Sharon
Discoverx Corporation
Gowling Lafleur Henderson Llp
LandOfFree
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