C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/82 (2006.01) A01H 5/00 (2006.01) A01K 67/027 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 15/79 (2006.01)
Patent
CA 2200496
The invention concerns a process for producing transgenic eucaryotic cells, particularly plants, which comprises: contacting a culture of untransformed cells with an inhibitor of poly-(ADP-ribose) polymerase for a period of time sufficient to reduce the response of the cultured cells to stress and to reduce their metabolism. The untransformed cells are then contacted with foreign DNA comprising at least one gene of interest under conditions in which the foreign DNA is taken up by the untransformed cells and the gene of interest is stably integrated in the nuclear genome of the untransformed cells to produce the transgenic cells. Optionally, the transgenic cells are recovered from the culture. Preferably, the inhibitor is niacinamide, preferably at a concentration of about 200 mg/l to 500 mg/l and the untransformed cells are cultured in a medium containing the inhibitor for a period of time of approximately 3 to 14 days prior to the contacting with the foreign DNA. The invention also relates to a plant having in the nuclear genome of its cells foreign DNA integrated only in the regions of the nuclear genome that are transcriptionally active in cells of the plant when the cells are treated with an effective amount of a PARP inhibitor for a period of time sufficient to reduce cell metabolism to a state where gene expression is essentially limited to genes expressed irrespective of the differentiated or physiological condition of the cell.
L'invention se rapporte à un procédé pour obtenir des cellules eucaryotes transgéniques, particulièrement de plantes. Ce procédé consiste à: mettre en contact une culture de cellules non transformées avec un inhibiteur de la poly-(ADP-ribose)polymérase pendant un temps suffisant pour diminuer la réponse des cellules cultivées au stress et pour diminuer leur métabolisme. Ensuite, les cellules non transformées sont mises en contact avec un ADN étranger comportant au moins un gène à étudier dans des conditions dans lesquelles l'ADN étranger est absorbé par les cellules non transformées et le gène à étudier est intégré de façon stable dans le génome nucléaire des cellules non transformées afin de produire des cellules transgéniques. Eventuellement, les cellules transgéniques sont récupérées à partir de la culture. De préférence, l'inhibiteur est l'amide nicotinique, de préférence à une concentration de 200 mg/l à 500 mg/l environ et les cellules non transformées sont cultivées dans un milieu contenant l'inhibiteur pendant une durée d'environ 3 à 14 jours avant d'être mises en contact avec l'ADN étranger. L'invention se rapporte également à une plante comprenant dans le génome nucléaire de ses cellules un ADN étranger intégré uniquement dans les régions du génome nucléaire qui présentent une activité de transcription dans les cellules de la plante lorsque les cellules sont traitées par une quantité efficace d'un inhibiteur de la PARP pendant un temps suffisant pour diminuer le métabolisme cellulaire à un niveau où l'expression génétique est essentiellement limitée à des gènes exprimés, sans tenir compte de la condition différenciée ou physiologique de la cellule.
Bayer Bioscience N.v.
Plant Genetic Systems N.v.
Robic
LandOfFree
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