C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/12 (2006.01) A01K 67/027 (2006.01) C07H 21/00 (2006.01) C07K 14/705 (2006.01) C12N 5/02 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 15/11 (2006.01) C12N 15/85 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2165098
Several genes encoding subunits of the neuronal nicotinic acetylcholine receptors have been cloned and regulatory elements involved in the transcription of the .alpha.:2 and .alpha.:7-subunit genes have been described. Yet, the detailed mechanisms governing the neuron-specific transcription and the spatio-temporal expression pattern of these genes remain largely uninvestigated. The .beta.2-subunit is the most widely expressed neuronal nicotinic receptors subunit in the nervous system. We have studied the structural and regulatory properties of the 5' sequence of this gene. A fragment of 1163 bp of upstream sequence is sufficient to drive the cell-specific transcription of a reporter gene in both transient transfection assays and in transgenic mice. Deletion analysis and site-directed mutagenesis of this promoter reveal two negative and one positive element. The positively acting sequence includes one functional E-box. One of the repressor elements is located in the transcribed region and is the NRSE/RE1 sequence already described in promoters of neuronal genes.
Plusieurs sous-unités d'encodage de gènes de récepteurs de l'acétylcholine nicotinique neuronale sont déjà clonés, et les éléments de régulation qui participent à la transcription des gènes des sous-unités .alpha.:2 et .alpha.:7 sont déjà décrits. Pourtant, les mécanismes détaillés régissant la transcription spécifique au neurone et le modèle d'expression spatiotemporelle de ces gènes demeurent largement non étudiés. La sous-unité .beta.2 constitue le récepteur nicotinique neuronal le plus largement exprimé dans le système nerveux.Nous avons étudié les propriétés struturales et régulatoires de la séquence 5' de ce gène. Un fragment de 1163 bp de séquence en amont est suffisant pour entraîner la transcription spécifique à la cellule d'un gène rapporteur dans des dosages de transcription transitoire et chez les rats transgéniques. L'analyse de suppression et la mutagénèse dirigée de ce promoteur révèlent deux éléments négatifs et un élément positif. La séquence agissant positivement comprend une boîte E fonctionnelle. Un des éléments répresseurs est situé dans la région transcrite et constitue la séquence NRSE/RE1 déjà décrite dans les promoteurs de gènes neuronaux.
Bessis Alain
Changeux Jean-Pierre
Picciotto Marina
Institut Pasteur
Sim & Mcburney
LandOfFree
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