C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/56 (2006.01) G01N 33/86 (2006.01)
Patent
CA 2224465
The present invention provides a method for determining thrombotic risk in an individual. The method involves determining the activity of Protein C and Protein S in the plasma of the individual thought to be at thrombotic risk by adding to a plasma sample obtained from the individual: (i) a first reagent in an amount sufficient to induce or activate coagulation in the plasma, (ii) a second reagent which activates endogenous protein C in the plasma, and (iii) a third reagent comprising calcium salts, phospholipids or tissue thromboplastin, or a combination thereof. To a second plasma sample from the same subject is added a reagent which induces or activates coagulation, and a buffer or other material which does not activate protein C, and a third reagent as described above. The time, rate or both, necessary for the conversion of endogenous fibrinogen to fibrin in both the first and second samples is measured. The same steps are performed on normal control plasma, and the difference or ratio in the times, rates, or both, obtained above are determined. The difference or ratio is indicative of the thrombotic risk in the subject. A kit adapted to carry out the method also is the subject of the present invention. The methods and kits of the invention in other embodiments may comprise a first reagent comprising a synthetic substrate, a second reagent which in the first sample from the subject activates protein C, and in the second sample, a second reagent which does not activate protein C. In these embodiments, the rates of hydrolysis of the synthetic substrates are measured and compared.
L'invention se rapporte à un procédé qui permet de déterminer le risque de thrombose chez un individu. Ce procédé consiste à déterminer l'activité de la protéine C et de la protéine S dans le plasma d'un individu dont on pense qu'il court le risque d'une thrombose, par addition dans un échantillon de plasma prélevé sur la personne (i) d'un premier réactif dans une quantité suffisante pour induire ou activer la coagulation à l'intérieur du plasma, (ii) d'un deuxième réactif qui active la protéine C endogène dans le plasma, et (iii) d'un troisième réactif comprenant des sels de calcium, des phospholipides ou la thromboplastine tissulaire, ou bien une combinaison de ces constituants. A un second échantillon de plasma prélevé sur la même personne, on ajoute un réactif qui induit ou active la coagulation, ainsi qu'un tampon ou autre matériau n'activant pas la protéine C, ainsi qu'un troisième réactif correspondant à la description du troisième réactif ci-dessus. On mesure le temps et/ou la vitesse requis de conversion du fibrinogène endogène en fibrine dans les premier et second échantillons. On réitère les mêmes opérations sur du plasma de contrôle normal et, ensuite, on évalue la différence ou le rapport des temps et/ou vitesses ainsi obtenus. La différence ou le rapport donne une indication sur le risque thrombotique chez la personne. On décrit par ailleur un kit approprié à la mise en oeuvre du procédé. Les procédés et les kits décrits dans d'autres modes de réalisation peuvent comporter un premier réactif ayant un support synthétique, un deuxième réactif qui active la protéine C dans l'échantillon prélevé sur la personne et, dans le second échantillon un deuxième réactif qui n'active pas la protéine C. Dans ces modes de réalisation, on mesure et on compare les vitesses d'hydrolyse des supports synthétiques.
Blake Cassels & Graydon Llp
Instrumentation Laboratory S.p.a.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1656153