C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/81 (2006.01) C07K 14/39 (2006.01) C12N 9/10 (2006.01) C12N 15/54 (2006.01) C12N 15/63 (2006.01) C12P 21/02 (2006.01)
Patent
CA 2362518
The invention relates to nucleic acid molecules comprising a heat-inducible promoter and to expression vectors and host cells containing at least one nucleic acid molecule according to the invention. The present invention further relates to kits and methods for producing one or more proteins using the nucleic acid molecules according to the invention, and to various uses of the same. The object of the invention is to provide a promoter the heat-inducible characteristic of which is as selective as possible, in particular a promoter which is active in yeasts and which is suitable for protein expression at high temperatures. This object is fulfilled by a nucleic acid molecule comprising a heat-inducible promoter and which is selected from the following nucleic acids: (a) a nucleic acid the sequence of which comprises the promoter sequence of a Hansenula polymorpha gene coding for a protein with trehalose-6-phosphate synthase activity; (b) a nucleic acid with the sequence indicated in SEQ ID NO:1; (c) a nucleic acid having a sequence which exhibits at least 40% identity over a length of 300 bp with one of the sequences indicated in (a) or (b); (d) a nucleic acid which hybridizes with the complementary strand of one of the nucleic acids indicated in (a), (b) or (c); (e) a derivative of one of the nucleic acids indicated in (a), (b) or (c) obtained by substitution, addition and/or deletion of one or more nucleotides; (f) a fragment of one of the nucleic acids indicated in (a) to (e) which retains the function of the heat-inducible promoter; (g) a combination of several of the nucleic acids indicated in (a) to (f), wherein the sequences of the nucleic acids may be different or the same; or of a nucleic acid molecule having a sequence complementary to the sequence of one of the nucleic acids indicated in (a) to (g).
L'invention concerne des molécules d'acide nucléique qui comprennent un promoteur thermo-inductible, ainsi que des vecteurs d'expression et des cellules hôtes qui contiennent au moins une molécule d'acide nucléique selon l'invention. La présente invention concerne en outre des trousses et des procédés pour produire une ou plusieurs protéines à l'aide des molécules d'acide nucléique selon l'invention, ainsi que différentes utilisations de celles-ci. L'objectif de l'invention est la préparation d'un promoteur thermo-inductible de la façon la plus sélective possible, en particulier d'un promoteur qui est actif dans les levures et qui convient pour l'expression de protéines à des températures élevées. Cet objectif est atteint grâce à une molécule d'acide nucléique qui comprend un promoteur thermo-inductible et qui est sélectionnée parmi les acides nucléiques suivants: (a) un acide nucléique dont la séquence comprend la séquence promoteur d'un gène de Hansenula polymorpha codant pour une protéine ayant une activité de tréhalose-6-phosphate-synthase; (b) un acide nucléique présentant la séquence correspondant au SEQ ID NO: 1; (c) un acide nucléique comportant une séquence qui présente, sur une longueur de 300 bp, une identité d'au moins 40 % avec une des séquences données dans (a) ou (b); (d) un acide nucléique qui s'hybride avec le contre-brin d'un des acides nucléiques donnés dans (a), (b) ou (c); (e) un dérivé d'un des acides nucléiques donnés dans (a), (b) ou (c), obtenu par substitution, addition et/ou délétion d'au moins un nucléotide; (f) un fragment d'un acide nucléique donné dans (a) à (e), qui conserve la fonction du promoteur thermo-inductible; (g) une combinaison de plusieurs des acides nucléiques donnés dans (a) à (f), les séquences des acides nucléiques pouvant être identiques ou différentes; ou bien une molécule d'acide nucléique présentant une séquence qui est complémentaire de la séquence d'un des acides nucléiques donnés dans (a) à (g).
de Virgilio Claudio
Gellissen Gerd
Romano Ivano
Borden Ladner Gervais Llp
Rhein Biotech Gesellschaft Fur Neue Biotechnologische Prozesse U
LandOfFree
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