C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 7/00 (2006.01)
Patent
CA 2495680
Methods for obtaining HCV complexes and HCV-like particles comprising HCV structural genes are provided. In one method, cells containing HCV-like particles are lysed with digitonin in the presence of protease inhibitors. Polyethylene glycol is slowly added to the lysate, to provide a precipitate that comprises complexes of the HCV structural proteins associated with lipid vesicles or micelles and complexes comprising viral structural proteins in the form of insoluble aggregates. In another method, the lysate is centrifuged through a sucrose cushion. Preferably, the pellet is then subjected to equilibrium ultracentrifugation, to provide a preparation of HCV-like particles that are heterogenous in size. The third method comprises subjecting the infected cells to hypertonic/hypotonic shock, and lysing the cells with digitonin in the presence of protease inhibitors. The lysate is pelleted and fractionated to provide a population of HCV-like particles that are substantially homogenous and have an average diameter of about 50 nm. As used herein the term " substantially homogenous" means that the shape of the particles are similar and that the size of the particles vary by 10% or less. Methods of using the HCV complexes and HCV-like particles as screening tools, diagnostic tools, and immunogenic compositions are also provided. Methods of treating patients exhibiting symptoms of HCV infection with compounds or substances that interfere with binding or internalization of the present HCV- like particles to asialoglycoprotein receptors are also provided.
L'invention concerne des procédés permettant d'obtenir des complexes du virus de l'hépatite C (HCV) et des particules de type HCV renfermant des gènes structurels du HCV. Dans un procédé, des cellules renfermant des particules de type HCV sont lysées avec de la digitonine, en présence d'inhibiteurs de la protéase. Du polyéthylène glycol est ajouté lentement au lysat, de manière à fournir un précipité comprenant des complexes des protéines structurelles HCV associées à des vésicules ou micelles lipidiques et des complexes renfermant des protéines structurelles virales sous la forme d'agrégats insolubles. Dans un autre procédé, le lysat est centrifugé dans un coussin de sucrose. Le culot est, de préférence, soumis ensuite à une ultracentrifugation à équilibre, de manière à fournir une préparation de particules de type HCV de dimensions hétérogènes. Le troisième procédé consiste à soumettre les cellules infectées à un choc hypertonique/hypotonique et à lyser les cellules avec de la digitonine, en présence d'inhibiteurs de la protéase. Le lysat est aggloméré et fractionné de manière à fournir une population de particules de type HCV sensiblement homogènes et possédant un diamètre moyen d'environ 50 nm. On entend par <= sensiblement homogènes >= que la forme des particules est similaire et les dimensions des particules varient d'au maximum 10 %. L'invention concerne enfin des procédés d'utilisation des complexes HCV et des particules de type HCV comme outils de criblage et de diagnostic, des compositions immunogéniques, ainsi que des procédés de traitement de patients présentant des symptômes d'une infection au HCV, au moyen de composés ou de substances interférant avec la liaison ou l'internalisation des particules de type HCV selon l'invention dans des récepteurs de l'asialoglycoprotéine.
Saunier Bertrand
Triyatni Miriam
Department Of Health And Human Services (nih) The Government Of The United States Of America As Represented By
Ohio University
Osler Hoskin & Harcourt Llp
LandOfFree
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