C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/62 (2006.01) C07K 14/72 (2006.01) C12N 1/19 (2006.01) C12N 15/12 (2006.01) C12N 15/31 (2006.01) C12N 15/81 (2006.01) C12Q 1/02 (2006.01)
Patent
CA 2183166
The present invention is directed to expression vectors and yeast cells transformed therewith containing a first heterologous nucleotide sequence which codes for a G protein-coupled receptor, for example, the somatostatin receptor, and a second nucleotide sequence which codes for all or a portion of a G protein .alpha..beta..gamma. complex. Said heterologous protein is physically expressed in a host cell membrane in proper orientation for both stereoselective binding of ligands, as well as functional interaction with G proteins on the cytoplasmic side of the cell membrane. In some embodiments, a nucleotide sequence encoding a heterologous or chimeric G.alpha. protein is expressed in conjunction with nucleotide sequences from the yeast G protein .beta..gamma. subunits. A second aspect of the present invention provides expression vectors and yeast cells transformed therewith encoding chimeric yeast/heterologous G protein coupled receptors. A third aspect of the present invention is directed to methods of assaying compounds using such expression constructs and yeast cell expression systems to determine the effects of ligand binding to the heterologous receptors expressed in the systems.
La présente invention se rapporte à des vecteurs d'expression et des cellules de levure transformées au moyen de ces vecteurs, contenant une première séquence nucléotidique hétérologue qui code pour un récepteur couplé à une protéine G, le récepteur de somatostatine, par exemple, et une seconde séquence nucléotidique qui code entièrement ou partiellement pour un complexe protéine G.alpha..beta..gamma.. Ladite protéine hétérologue est physiquement exprimée dans une membrane de cellule hôte dans l'orientation appropriée à la fois pour la liaison stéréosélective des ligands et pour l'interaction fonctionnelle avec des protéines G sur le côté cytoplasmique de la membrane cellulaire. Dans certains modes de réalisation, une séquence nucléotidique codant une protéine G.alpha. hétérologue ou chimère est exprimée conjointement avec les séquences nucléotidiques provenant des sous-unités .beta..gamma. de la protéine G de levure. Dans un second aspect, la présente invention se rapporte à des vecteurs d'expression et à des cellules de levure transformées au moyen de ces vecteurs, codant les récepteurs couplés à une protéine G hétérologue/de levure chimère. Dans un troisième aspect, la présente invention se rapporte à des méthodes de dosage de composés faisant appel à ces produits de recombinaison d'expression ainsi qu'à des systèmes d'expression de cellules de levure afin de déterminer les effets de la liaison des ligands aux récepteurs hétérologues exprimés dans ces systèmes.
Chaleff Deborah Tardy
Hadcock John Richard
Kajkowski Eileen Marie
Kirsch Donald Richard
Ozenberger Bradley Alton
Smart & Biggar
Wyeth
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-2072794