C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/86 (2006.01) C07K 14/15 (2006.01) C07K 14/72 (2006.01) C07K 14/725 (2006.01) C07K 14/73 (2006.01) C07K 16/10 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 15/867 (2006.01) C12N 15/87 (2006.01) A61K 48/00 (2006.01)
Patent
CA 2229847
The invention provides a novel retroviral packaging system, in which retroviral packaging plasmids and packageable vector transcripts are produced from high expression plasmids after stable or transient transfection in mammalian cells. High titers of recombinant retrovirus are produced in these transfected mammalian cells and can then transduce a mammalian target cell by cocultivation or supernatant infection. The methods of the invention include the use of the novel retroviral packaging plasmids and vectors to transduce primary human cells, including T cells and human hematopoietic stem cells, with foreign genes by cocultivation or supernatant infection at high efficiencies. The invention is useful for the rapid production of high titer viral supernatants, and to transduce with high efficiency cells that are refractory to transduction by conventional means.
L'invention concerne un nouveau système d'encapsidation de rétrovirale dans lequel les plasmides d'encapsidation rétrovirale et les transcrits vectoriels se prêtant à l'encapsidation sont obtenus à partir de plasmides à forte expression après la transfection stable ou transitoire de cellules mammaliennes. Il en résulte dans ces cellules transfectées des titres élevés pour les rétrovirus recombinés, d'où la possibilité d'une transduction ultérieure de cellules cibles mammaliennes par coculture ou par infection par des surnageants. Les procédés décrits font intervenir les nouveaux vecteurs et plasmides d'encapsidation rétrovirale pour la transduction de cellules humaines primaires, y compris les lymphocytes T et les cellules souches hématopoïétiques humaines, par l'intermédiaire de gènes étrangers suite à une coculture ou à une infection par des surnageants très efficaces. Le système est utile pour la production rapide de surnageants viraux à titre élevé et la transduction à haute efficacité de cellules réfractaires à la transduction effectuée par des moyens classiques.
Cooke Keegan
Dull Thomas J.
Farson Deborah A.
Finer Mitchell H.
Zsebo Krisztina M.
Cell Genesys Inc.
Gowling Lafleur Henderson Llp
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1484596