High sensitivity immunoassay method

Details High sensitivity immunoassay method High sensitivity immunoassay method

G - Physics

01

N

G01N 33/543 (2006.01) G01N 21/64 (2006.01) G01N 33/53 (2006.01) G01N 33/533 (2006.01) G01N 33/58 (2006.01) G01N 33/68 (2006.01)

Patent

CA 2385613

A method for detecting a cytokine in a biological fluid sample with a high sensitivity is provided. A time-resolved fluoroimmunoassay (TR-FIA) method including a step of forming on a solid phase a composite in which a cytokine is captured and which includes a fluorescent structural portion which has been complexed with a lanthanoid metal ion, and measuring fluorescence of the fluorescent structural portion. The composite is formed of a structure in which (a) a first antibody including a portion bound to a solid phase and a region bindable to a cytokine; (b) the cytokine; (c) a second antibody including a region bindable to the cytokine and a portion to which biotin is bound; (d) a conjugate including streptoavidin or avidin and a fluorescent structural portion capable of being complexed with a lanthanoid metal ion; and (e) the lanthanoid metal ion are bound. The fluorescent structural portion is represented by General Formula (I):

Cette invention a trait à un dosage immunologique par fluorescence en temps différé (TR-FIA) permettant de détecter la présence de cytokine dans un prélèvement liquide biogénique. Ce dosage consiste à capturer la cytokine et à former son complexe avec un ion de métal du type des lanthanides ayant une fraction fluorescente dans une phase solide, puis, à mesurer la fluorescence émanant de cette fraction. Le complexe comprend, (a), un premier anticorps dont une fraction est liée à la phase solide ainsi qu'une région capable de se fixer à la cytokine, (b), de la cytokine, (c), un second anticorps possédant une région capable de se fixer à la cytokine et une fraction liée à de la biotine, (d), un connectif contenant de la streptoavidine ou de l'avidine et une fraction fluorescente capable de former un complexe avec un ion métallique du type des lanthanides et, (e), un ion métallique du type des lanthanides, lesquels sont liés séquentiellement dans l'ordre susmentionné. La fraction fluorescente correspond à la formule générale (I). Il est possible d'utiliser ce dosage immunologique pour détecter de la cytokine dans un prélèvement biogénétique et ce, avec une sensibilité améliorée.

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