High specificity homocysteinases

Details High specificity homocysteinases High specificity homocysteinases

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 15/60 (2006.01) C12N 1/15 (2006.01) C12N 1/19 (2006.01) C12N 1/21 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 9/88 (2006.01) C12N 15/09 (2006.01) C12Q 1/02 (2006.01) C12Q 1/48 (2006.01) G01N 31/00 (2006.01) G01N 31/10 (2006.01) G01N 33/50 (2006.01) G01N 33/483 (2006.01) G01N 33/68 (2006.01)

Patent

CA 2369842

Homocysteinase enzymes are disclosed which have sufficient specificity for homocysteine, as compared to cysteine that hydrogen sulfide can be used as a measure of homocysteine in a biological fluid even in the presence of substantial amounts of cysteine, exceeding the level of homocysteine. The enzyme of desired specificity can be readily prepared by mutation and screening of naturally occuring homocysteinases or by constructing chimeric forms. Also disclosed is a method to identify homocysteinases of the desired specificity with respect to homocysteine and cysteine, as well as an improved method to assay for hydrogen sulfide by employing a fluorometric readout of a chromophore generated from said hydrogen sulfide. Also included in the scope of the invention is a method to assess the level of cysteine and homocysteine in the same sample.

L'invention concerne des enzymes homocystéinases qui présentent une action spécifique pour l'homocystéine suffisante, en comparaison avec la cystéine, pour que l'hydrogène sulfuré puisse servir de mesure de l'homocystéine dans un fluide biologique, y compris en présence de quantités substantielles de cystéine, qui dépassent le taux d'homocystéine. L'enzyme présentant la spécificité voulue peut être facilement préparé par mutation et par criblage d'homocystéinases naturelles ou par construction de formes chimères. L'invention concerne également une méthode d'identification des homocystéinases présentant la spécificité voulue par rapport à l'homocystéine et à la cystéine, ainsi qu'une méthode améliorée permettant d'effectuer des dosages de l'hydrogène sulfuré au moyen d'une indication fluorométrique d'un chromophore généré à partir de l'hydrogène sulfuré. L'invention concerne en outre une méthode d'évaluation du taux de cystéine et d'homocystéine dans le même échantillon.

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