High-throughput assay

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G - Physics

01

N

G01N 33/543 (2006.01) C12Q 1/25 (2006.01) G01N 33/53 (2006.01) G01N 33/545 (2006.01) G01N 33/546 (2006.01) G01N 33/566 (2006.01) G01N 33/68 (2006.01)

Patent

CA 2291621

A homogeneous high-throughput assay is described which screens compounds for enzyme inhibition, or receptor or other target binding. Inhibition (or binding) by the library compounds causes a change in the amount of an optically detectable label that is bound to suspendable cells or solid supports. The amounts of label bound to individual cells or solid supports are microscopically determined, and compared with the amount of label that is not bound to individual cells or solid supports. The degree of inhibition or binding is determined using this data. Confocal microscopy, and subsequent data analysis, allow the assay to be carried out without any separation step, and provide for high throughput screening of very small assay volumes using very small amounts of test compound.

L'invention concerne un technique homogène à haut rendement, qui permet de cribler des composés pour rechercher une activité d'inhibition, de récepteur ou de fixation enzymatique à une autre molécule cible. Une inhibition (ou fixation) produite par des composés de la banque provoque une modification de la quantité d'un marqueur pouvant être détecté par des moyens optiques, et qui est lié à des cellules ou à des supports solides susceptibles d'être suspendus. Les quantités de marqueur lié à des cellules individuelles ou à des supports solides sont déterminées par microscopie, et comparées à la quantité de marqueur qui n'est pas lié à des cellules individuelles ou à des supports solides. Le degré d'inhibition ou de fixation est déterminé à l'aide de ces données. La microscopie confocale, et des analyses de données qui en découlent, permettent de mettre en oeuvre la technique sans aucune étape de séparation, et d'obtenir un criblage à haut rendement de très petits volumes d'essai utilisant de très petites quantités de composés de test.

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