High-throughput prion assays

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

Patent

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C12N 9/58 (2006.01) C07K 14/81 (2006.01) G01N 33/531 (2006.01)

Patent

CA 2523745

The invention is directed to a method for performing a high-throughput test to determine the presence of PrPsc in a tissue sample taken post mortem from brain, comprising: (A) sample preparation, (B) sample treatment, (C) sample analysis, (D) controls, and (E) classifying the results of the analysis. The invention is further directed to preparing a treated biological sample suspected of containing PrPsc suitable for detection of PrPsc. The method comprises (a) homogenizing the sample; (b) digesting the sample proteolytically by adding to the homogenate Proteinase K and incubating the sample; (c) adding a peptidic protease inhibitor to the incubated mixture of step (b). The invention further provides a conditioned microwell plate, and a soluble fusion protein.

L'invention porte sur une méthode permettant de réaliser un test à haut rendement décelant la présence de PrPsc dans un échantillon de tissu prélevé dans le cerveau après le décès. La méthode comprend (A) la préparation de l'échantillon, (B) le traitement de l'échantillon, (C) l'analyse de l'échantillon, (D) les témoins et (E) le classement des résultats de l'analyse. L'invention concerne également la préparation d'un échantillon biologique traité, soupçonné de contenir du PrPsc et dans lequel il est possible de déceler le PrPsc. La méthode comprend (a) l'homogénéisation de l'échantillon, (b) la digestion protéolytique de l'échantillon par l'ajout de protéinase K à l'homogénat et l'incubation de l'échantillon (c) et l'ajout d'un inhibiteur de protéases brisant les liaisons peptidiques au mélange à incuber de l'étape (b). L'invention porte également sur une microplaque de puits conditionnée et sur une protéine de fusion soluble.

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