G - Physics – 01 – N
Patent
G - Physics
01
N
G01N 33/53 (2006.01) C12Q 1/48 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01) G01N 33/542 (2006.01)
Patent
CA 2380238
Double-labeled protein biomolecular substrates (70) and methods for the homogenous assay of processes which include covalent modification of the substrates (70) to form a detectable species are described. The biomolecular substrates (70) of the instant invention are labeled at two positions (80, 90) with two fluorescent dyes or with a fluorescent dye and a nonfluorescent dye. The two labeling dyes of the unmodified substrate (70) stack (95), thereby quenching the substrate's fluorescence. Upon covalent modification of the double-labeled substrate (70), however, the intramolecularly stacked dyes (95) dissociate and the fluorescence changes markedly. Examples are described for the preparation and use of substrates (70) for phosphorylation assays. Methods of invention do not require separation of the modified and unmodified substrates (70), nor do they require other special reagents or radioactive materials. Therefore the substrates can be used for monitoring intracellular processes of living cells.
L'invention concerne des substrats biomoléculaires de protéines à double marquage et des procédés d'analyse homogène de processus de modification covalente de biomolécules. Ces procédés mettent en application des substrats biomoléculaires marqués dans deux positions par deux colorants fluorescents et par un colorant fluorescent et un colorant non fluorescent. Les deux colorants de marquage des substrats biomoléculaires non modifiés s'empilent, ce qui éteint la fluorescence du substrat. Cependant, dans le cas d'une modification covalente du substrat à double marquage, les colorants empilés à l'intérieur des molécules se dissocient et la fluorescence du substrat phosphorylé se modifie considérablement. Les procédés mettant en application ces substrats à double marquage ne nécessitent pas de séparation physique de molécules du substrat modifié ou non, ni d'autres réactifs spéciaux ou matériaux radioactifs. Elle concerne des procédés servant à préparer et à caractériser les substrats utilisés dans le processus d'analyse, ainsi que des procédés mettant en application ces substrats pour un criblage très productif, pour le contrôle de processus intracellulaires de modification biomoléculaire covalente dans des cellules vivantes, pour effectuer le diagnostic et le traitement de maladies impliquant des processus dysfonctionnels de modification biomoléculaire covalente et pour découvrir de nouveaux substrats enzymatiques.
Oyen Wiggs Green & Mutala Llp
University Of Utah Research Foundation
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1890555