C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C12M 1/34 (2006.01)
Patent
CA 2398362
The invention provides homogeneous assay methods for nucleic acid hybridization, detection and evaluation. The assay includes obtaining signals from a test sample both before and during the application of a voltage to the test sample and correlating the signals, each of which is indicative of the binding affinity of the probe and the target to each other. The assay enables determining an extent of matching between the probe and the target, as the voltage can be calibrated so as to destabilize signifi-cantly any hybridization except perfectly complementary hybridization. The signals whose magnitude is correlated with binding affinity can be electrical conductance and/or fluorescent intensity. Preferably, both signal pairs are measured and compared so as to enhance the reliability of the assay. The assay can detect specific hybridization between single-stranded probes and non-denatured double-stranded targets to form triplexes, thus obviating the need to denature the targets. The assay methods can also be applied to duplex hybridization complexes.
L'invention concerne des techniques d'analyse homogène destinées à l'hybridation, la détection et l'évaluation d'acides nucléiques. Cette analyse consiste à obtenir des signaux depuis un échantillon d'essai, avant et pendant l'application d'une tension audit échantillon, et à établir une corrélation entre ces signaux qui indiquent l'affinité de liaison entre la sonde et la cible. Cette analyse permet de déterminer l'ampleur de la correspondance entre la sonde et la cible, la tension pouvant être étalonnée de manière à déstabiliser de façon significative toute hybridation à l'exception d'une hybridation parfaitement complémentaire. Les signaux dont l'amplitude correspond à une affinité de liaison peuvent être une conductance électrique et/ou une intensité de fluorescence. On mesure et on compare de préférence les deux paires de signaux de manière à accroître la fiabilité de l'analyse. Cette analyse permet de détecter une hybridation spécifique entre des sondes monocaténaires et des cibles bicaténaires non dénaturées pour former des triplex, ce qui rend superflue la dénaturation des cibles. Les techniques d'analyse de l'invention peuvent également s'appliquer à des complexes d'hybridation de duplex.
Daksis Jasmine I.
Erikson Glen H.
Picard Pierre
Daksis Jasmine I.
Gowling Lafleur Henderson Llp
Ingeneus Corporation
Ingeneus Inc.
Picard Pierre
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1843280