Identification of sortase gene

Details Identification of sortase gene Identification of sortase gene

A - Human Necessities

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K

A61K 39/00 (2006.01) A61K 39/02 (2006.01) A61K 39/085 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) C07K 1/00 (2006.01) C07K 16/00 (2006.01) C12N 9/80 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12P 21/06 (2006.01) G01N 33/53 (2006.01)

Patent

CA 2455435

The present invention is a substantially purified sortase-transamidase enzyme from Gram-positive bacteria, such as Staphylococcus aureus. The enzyme having a molecular weight of about 23,539 or about 29,076 daltons and catalyzing a reaction that covalently cross-links the carboxyl terminus of a protein having a sorting signal to the peptidoglycan of a Gram-positive bacterium, the sorting signal having: (1) a motif of LPX3X4G or NPQ/KTN/G therein; (2) a substantially hydrophobic domain of at least 31 amino acids carboxyl to the motif; and (3) a charged tail region with at least two positively charged residues carboxyl to the substantially hydrophobic domain, at least one of the two positively charged residues being arginine, the two positively charged residues being located at residues 31-33 from the motif, wherein X3 is any of the twenty naturally-occurring L-amino acids, and X4 us alonine, serine, or thiconine. Variants of the enzyme, methods for cloning the gene encoding the enzyme and expressing the cloned gene, and methods of use of the enzyme, including for screening for antibiotics and for display of proteins or peptides on the surfaces of Gram-positive bacteria, are also disclosed.

La présente invention concerne une enzyme sortase-transamidase sensiblement purifiée provenant d'une bactérie Gram positif, telle que <i>Staphylococcus aureus</i>. Cette enzyme présente une masse moléculaire d'environ 23,539 ou environ 29,076 daltons et catalyse une réaction entraînant une réticulation par covalences de l'extrémité carboxylique d'une protéine présentant un signal de triage avec le peptidoglycane d'une bactérie Gram positif, le signal de triage présentant: (1) un motif de LPX¿3?X¿4?G ou de NPQ/KTN/G; (2) un domaine sensiblement hydrophobe d'au moins 31 acides aminés carboxyle dans le motif; et (3) une région de queue chargée présentant au moins deux restes carboxyle chargés positivement dans le domaine sensiblement hydrophobe; au moins l'un des deux restes positivement chargés étant l'arginine; les deux restes chargés positivement étant placés au niveau des restes 31 à 33 du motif; X¿3? représente n'importe lequel des 20 acides aminés d'origine naturelle, et X¿4? représente l'alonine, la serine, ou la thréonine. La présente invention concerne également des variants de l'enzyme, des procédés permettant de cloner le gène codant pour cette enzyme et d'exprimer le gène cloné. L'invention concerne également des procédés d'utilisation de cette enzyme, notamment pour cribler des antibiotiques et pour présenter des protéines ou des peptides sur les surfaces des bactéries Gram positif.

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