Immobilized mismatch binding protein for detection or...

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q

Patent

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C12Q 1/68 (2006.01) C07K 14/245 (2006.01) C07K 17/00 (2006.01) C12S 3/20 (2006.01)

Patent

CA 2175222

A method for detecting mutations, such as a single base change or an addition or deletion of about one to four base pairs, is based on the use of an immobilized DNA mismatch-binding protein, such as MutS, which binds to a nucleic acid hybrid having a single base mismatch or unpaired base or bases, thereby allowing the detection of mutations involving as little as one base change in a nucleotide sequence. Such a method is useful diagnosing a variety of important disease states or susceptibilities detecting the presence of a mutated oncogene and for isolating or removing by affinity chromatography duplex DNA molecules containing mismatches such as error-containing molecules in PCR-amplified DNA samples. Also provided are kits useful for practicing the methods of the present invention.

L'invention concerne un procédé de détection de mutations, comme le changement d'une seule base ou l'addition ou la suppression d'environ une à quatre paires de bases, qui se fonde sur l'utilisation d'une protéine immobilisée fixatrice de mésappariements de bases d'ADN, comme des agents mutagènes, qui fixe un hybride d'acide nucléique ayant un mésappariement d'une seule base ou une base ou des bases non appariées, ce qui permet de détecter des mutations n'impliquant que le changement d'une seule base dans une séquence nucléotidique. Ce type de procédé s'utilise pour diagnostiquer une pluralité d'états pathologiques ou de prédispositions à des maladies, qui sont majeurs, pour détecter la présence d'un oncogène ayant subi une mutation et pour isoler ou extraire, par chromatographie par affinité, des molécules d'ADN duplex contenant des mésappariements, tels que des molécules contenant des erreurs dans des échantillons d'ADN amplifié par PCR. L'invention concerne également des trousses utilisées pour mettre lesdits procédés en oeuvre.

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