C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/60 (2006.01) C12N 9/88 (2006.01) C12P 19/02 (2006.01)
Patent
CA 2568728
The invention relates to isolated mutants of enzymes from the group of 2-deoxy- D-ribose 5-phosphate aldolase wild-type enzymes having a productivity factor (as determined by a specific test) which is at least 10% higher than the productivity factor for the corresponding wild-type enzyme from which it is a mutant. The mutants have at least one amino acid substitution at one or more of the positions corresponding to K13, T19, Y49, N80, D84, A93, E127, A128, K146, K160,1166, A174, M185, K196, F200, and S239 in Escherichia coli K12 (EC 4.1.2.4) wild-type enzyme sequence, and/or a deletion of at least one amino acid at the positions corresponding to S258 and Y259 therein, optionally combined with, specific, C-terminal extension and/or N terminal extension. The invention also relates to screening processes to find 2-deoxy-D-ribose 5- phosphate aldolase enzymes (either as such or as mutants) having a productivity factor (as determined by said specific test, which forms an essential part of the screening) which is at least 10% higher than the reference value. Moreover, the invention relates to mutant enzymes obtained by the screening process, and to nucleic acids encoding such mutants, and to vectors and host cells comprising, respectively, such nucleic acids or mutants. Finally the invention relates to the use of such (preferably mutant) enzymes, nucleic acids, vectors and host cells in the production of, for instance, 6-chloro-2,4,6-trideoxy~D-erythrohexapyranoside.
L'invention concerne des mutants isolés d'enzymes du groupe d'enzymes du type sauvage 2-désoxy-D-ribose 5-phosphate aldolase possédant un facteur de productivité (tel que déterminé par un test spécifique) d'au moins 10 % supérieur à celui de l'enzyme de type sauvage correspondante de laquelle elle est un mutant. Ces mutants possèdent une substitution aminoacide au niveau d'une ou plusieurs positions correspondant à K13, T19, Y49, N80, D84, A93, E127, A128, K146, K160,1166, A174, M185, K196, F200, et S239 dans la séquence enzymatique de type sauvage Escherichia coli K12 (EC 4.1.2.4), et/ou une délétion d'au moins un acide aminé au niveau des positions correspondant à S258 et Y259 du dossier, éventuellement combinée à une extension c-terminal spécifique et/ou une extension N-terminal. L'invention porte sur des procédés de criblage permettant de rechercher les enzymes 2-désoxy-D-ribose 5-phosphate aldolases (telles quelles ou mutantes) possédant un facteur de productivité (tel que déterminé par ledit test spécifique, qui forme une partie essentielle du criblage) d'au moins 10 % supérieur à la valeur de référence. Par ailleurs, l'invention porte sur des enzymes mutantes obtenues par le procédé de criblage, sur des acides nucléiques codant lesdits mutants et sur des vecteurs et des cellules hôtes comprenant, respectivement, lesdits acides nucléiques ou mutants. Finalement, l'invention se rapporte à l'utilisation desdits enzymes (de préférence mutantes), d'acides nucléiques, de vecteurs et de cellules hôtes dans la production de, par exemple, 6-chloro-2,4,6-tridésoxy-D-érythrohexapyranoside.
Jennewein Stefan Martin
Mink Daniel
Mommers Johannes Helena Michael
Schuermann Martin
Wolberg Michael
Dsm Ip Assets B.v.
Smart & Biggar
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1871825