Improved cryoprotectant solutions

A - Human Necessities – 01 – N

Patent

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Details

A01N 1/02 (2006.01) A01N 31/02 (2006.01) A01N 37/02 (2006.01) C09K 3/18 (2006.01) C09K 5/20 (2006.01)

Patent

CA 2345009

Surprising new combinations of previously-known and novel cryoprotectants are provided that yield superior recovery of function and viability of living systems after exposure to and removal from said systems. These and related combinations are useful for cryopreservation by vitrification, freezing, supercooling, freezing point depression, or cold storage. It is disclosed that, contrary to current opinion, ideal solutions for cryopreservation are those that vitrify "poorly" (i.e., at higher rather than at lower concentrations). Contrary to expectation, by using relatively "poor" vitrifiers, the water content of the solution is reduced at the concentration needed to vitrify, but the water availability within the solution is believed to be paradoxically increased, thereby increasing viability. A novel method for understanding and predicting non-specific cryoprotectant toxicity is provided based on a new definition of cryoprotectant "concentration", which is the number of water molecules per polar group on penetrating cryoprotectants. Compositions are provided that vitrify at relatively high concentrations, yet surprisingly also devitrify slowly on warming. Databases of novel vitrification/devitrification and toxicity data are provided that allow the ordinary practitioner of the art to select specific solutions or obvious solution variants to meet the user's specific cryopreservation needs.

L'invention concerne de nouvelles combinaisons surprenantes de cryoprotecteurs déjà connus et de cryoprotecteurs nouveaux, produisant une récupération des fonctions et une viabilité élevées de systèmes vivants après exposition à ces cryoprotecteurs et retrait de ces cryoprotecteurs. Ces combinaisons et analogues s'utilisent pour la cryopréservation par vitrification, congélation, surfusion, abaissement du point de congélation ou entreposage sous froid. On a découvert que, contrairement à une opinion répandue, les solutions de cryopréservation idéales sont celles qui vitrifient <=faiblement>= (c.-à-d. dans des concentrations élevées plutôt que basses). Contrairement aux prédictions, l'utilisation d'agents de vitrification <=faibles>= réduit la teneur en eau de la solution dans la concentration nécessaire à la vitrification mais on estime que l'hydraulicité dans la solution augmente de manière paradoxale, ce qui augmente la viabilité. L'invention concerne un nouveau procédé de compréhension et de prédiction de toxicité de cryoprotecteur non spécifique sur la base d'une nouvelle définition de la <=concentration>= de cryoprotecteurs, qui représente le nombre de molécules d'eau par groupe polaire lors de la pénétration des cryoprotecteurs. Des compositions se vitrifient dans des concentrations relativement élevées et, chose surprenante, se dévitrifient aussi lentement en se réchauffant. Des bases de données des nouvelles données de vitrification/dévitrification et de toxicité permettent au spécialiste ordinaire de sélectionner des solutions spécifiques ou des variants appropriés de la solution pour répondre aux besoins spécifiques de cryopréservation de l'utilisateur.

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