G - Physics – 01 – N
Patent
G - Physics
01
N
G01N 33/566 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) C07K 1/00 (2006.01) C12N 1/20 (2006.01) C12P 21/06 (2006.01)
Patent
CA 2530497
In one aspect, the present invention relates to a mammalian cell-based high- throughput assay for the profiling and screening of human epithelial sodium channel (hENaC) cloned from a human kidney c-DNA library and is also expressed in other tissues including human taste tissue. The present invention further relates to amphibian oocyte-based medium-throughput electrophysiological assays for identifying human ENaC modulators, preferably ENaC enhancers. Compounds that modulate ENaC function in a cell-based ENaC assay are expected to affect salty taste in humans. The assays described herein have advantages over existing cellular expression systems. In the case of mammalian cells, such assays can be run in standard 96 or 384 well culture plates in high- throughput mode with enhanced assay results being achieved by the use of a compound that inhibits ENaC function, preferably an amiloride derivative such as Phenamil. In the case of the inventive oocyte electrophysiological assays (two-electrode voltage-clamp technique), these assays facilitate the identification of compounds which specifically modulate human ENaC. The assays of the invention provide a robust screen useful to detect compounds that facilitate (enhance) or inhibit hENaC function. Compounds that enhance or block human ENaC channel activity should thereby modulate salty taste in humans.
Dans un mode de réalisation, la présente invention a trait à un dosage à haute efficacité à base de cellule mammalienne pour l'établissement de profils et le criblage du canal sodique épithélial humain cloné à partir d'une bibliothèque d'ADNc de rein humain et également exprimé dans d'autres tissus, y compris le tissu gustatif humain. La présente invention a également trait à des dosages électrophysiologiques à efficacité moyenne basés sur des ovocytes amphibiens pour l'identification de modulateurs du canal sodique épithélial, de préférence des amplificateurs du canal sodique épithélial. On prévoit que des composés modulateurs de la fonction du canal sodique épithélial dans un dosage du canal sodique épithélial basé sur des cellules vont affecter le goût salé chez les humains. Les dosages de l'invention présentent des avantages par rapport aux systèmes d'expression cellulaire existants. Dans le cas des cellules mammaliennes, de tels dosages peuvent être réalisés dans des plaques standard de culture de 96 ou 384 puits en mode à efficacité élevée avec des résultats de dosage améliorés au moyen d'un composé inhibiteur de la fonction du canal sodique épithélial, de préférence un dérivé amiloride tel que le Phénamil. Dans le cas de dosages électrophysiologiques d'ovocytes de l'invention (technique de pince de tension à deux électrodes), ces dosages facilitent l'identification de composés qui sont des modulateurs spécifiques du canal sodique épithélial humain. Les dosages selon l'invention fournissent un criblage robuste utile dans la détection de composés facilitant (amplifiant) ou inhibant la fonction du canal sodique épithélial humain. Des composés qui amplifient ou bloquent l'activité de la voie du canal sodique épithélial doivent donc permettre d'assurer la modulation de goût salé chez les humains.
Chang Hong
Clark Imran
Moyer Bryan
Redcrow Cyril
Servant Guy
Gowling Lafleur Henderson Llp
Senomyx Inc.
LandOfFree
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