C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2356613
The present invention provides a method for detecting a single-stranded target nucleic acid comprising the steps of: a) forming a hybrid between a target nucleic acid and a nucleic acid probe, said nucleic acid probe labelled with an enzyme reagent which hydrolyses single-stranded nucleic acid but is substantially without effect on double-stranded nucleic acid, said hybrid formed under conditions of pH which are outside the activity range of said enzyme reagent; b) adjusting said pH to a value within the activity range of said enzyme reagent, whereby said enzyme reagent substantially hydrolyses any single-stranded nucleic acid present; and c) contacting said hybrid with a detection reagent to detect the hybrid, <u>characterised by</u>, prior to step (c), bringing the nucleic acid probe or hybrid into contact with a solid support to attach it thereto or bringing the nucleic acid probe or hybrid into contact with a capture reagent, optionally linked to a solid support, to capture the nucleic acid probe or hybrid; and washing the capture reagent or solid support on which the hybrid is immobilised with a washing fluid while the capture reagent or solid support is contained within a vessel that is adapted to retain the capture reagent or solid support but not to retain fluid in which the capture reagent or solid support is dispersed, whereby material which has not been captured by the capture reagent or otherwise immobilised on a solid support is eluted from the vessel.
L'invention concerne un procédé servant à détecter un acide nucléique simple brin cible, qui comporte les étapes consistant à: a) former un hybride entre un acide nucléique cible et une sonde d'acide nucléique, ladite sonde d'acide nucléique étant marquée par un réactif enzymatique qui hydrolyse l'acide nucléique simple brin mais est sensiblement dépourvu d'effet sur un acide nucléique double brin, ledit hybride étant formé dans des conditions de pH se situant en dehors de la plage d'activité dudit réactif enzymatique; b) régler ledit pH à une valeur se situant dans la plage d'activité dudit réactif enzymatique, ce qui permet audit réactif enzymatique d'hydrolyser sensiblement tout acide nucléique simple brin présent; et c) mettre en contact ledit hybride avec un réactif de détection pour détecter l'hybride, cette étape <u>étant caractérisée par</u> la mise en contact, avant la mise en oeuvre de l'étape (c), de la sonde d'acide nucléique ou de l'hybride avec un support solide pour la/le fixer à celui-ci, ou mettre en contact la sonde d'acide nucléique ou l'hybride avec un réactif de capture, éventuellement lié à un support solide, pour capturer la sonde d'acide nucléique ou l'hybride; et laver le réactif de capture ou le support solide sur lequel est immobilisé l'hybride à l'aide d'un fluide de lavage pendant que le réactif de capture ou le support solide est contenu dans un récipient conçu pour retenir le réactif de capture ou le support solide, mais qui ne retient pas le fluide dans lequel le réactif de capture ou le support solide est dispersé, ce qui permet d'éluer du récipient la matière qui n'a pas été capturée par le réactif de capture ou autrement immobilisée sur un support solide.
Harbron Stuart
Mbm & Co.
Zetatronics Limited
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1709451