C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/57 (2006.01) A23J 3/34 (2006.01) C11D 3/386 (2006.01) C12N 1/21 (2006.01) C12N 9/54 (2006.01) C12P 21/02 (2006.01) C12P 21/06 (2006.01) C14C 1/06 (2006.01)
Patent
CA 2284714
The present invention provides genes encoding variants of metallo- endopeptidases that have been engineered to be resistant to prolonged boiling while having maintained their enzymatic performance at much lower temperatures. In addition, thermal stability of the metallo-endopeptidases is highly dependent on calcium at concentrations in the mM range. The invention further provides active metallo-endopeptidases variants whose stability depending on calcium concentration can be changed so as to provide metallo- endopeptidases that are calcium dependent or independent. The invention also provides genes that encode boiling-resistant metallo-endopetidases whose stability depending on calcium concentration can be changed. The invention also provides vectors and cells comprising these genes and proteases produced through these genes, vectors and/or cells. In particular variants with the above described properties are provided of thermolysin-like proteases such as produced by Bacillus stearothermophilus (TLP-ste) and Bacillus thermoproteolyticus (thermolysine). Boiling-resistant and calcium independent or dependent metallo-endopeptidases can be applied in several industrial processes, for instance in the preparation of the artificial sweetener aspartame, but also in the leather industry, in breweries and in the production of protein hydrolysates.
La présente invention concerne des gènes codant des variants de métallo-endopeptidases qui ont été modifiées génétiquement pour résister à une ébullition prolongée et conservent cependant leurs propriétés enzymatiques à des températures beaucoup plus basses. En outre, la stabilité thermique des métallo-endopeptidases dépend notamment des teneurs en calcium, lesquelles sont de l'ordre du mM. L'invention concerne en outre des variants de métallo-endopeptidases actives, dont la stabilité peut être modifiée en fonction de la teneur en calcium, afin de constituer des métallo-endopeptidases qui sont dépendantes ou non du calcium. L'invention concerne encore des gènes codant des métallo-endopeptidases résistantes à l'ébullition et dont la stabilité, qui dépend de la teneur en calcium, peut être changée, ainsi que des vecteurs et des cellules comprenant ces gènes, et des protéases produites au moyen de ces gènes, vecteurs et/ou cellules. On décrit notamment des variants de protéases de type thermolysine, possédant les propriétés ci-dessus décrites, tels ceux produits par Bacillus stearothermophilus (TLP-ste) et Bacillus thermoproteolyticus (thermolysine). On peut utiliser des métallo-endopeptidases résistantes à l'ébullition et dépendantes ou non du calcium, dans divers procédés industriels, par exemple dans la préparation de l'édulcorant artificiel aspartame, mais également dans l'industrie du cuir, dans des brasseries et dans la production d'hydrolysats de protéines.
Van Den Burg Lambertus
Veltman Oene Robert
Venema Gerard
Fetherstonhaugh & Co.
Rijksuniversiteit Te Groningen
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1974217