C - Chemistry – Metallurgy – 12 – P
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
P
C12P 19/34 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01)
Patent
CA 2512701
A method for preparing a cDNA from a mRNA using a reverse transcriptase wherein reverse transcription is performed at a temperature at which the mRNA does not take a secondary structure, for example, at a temperature of 45°C or more. The method is performed, for example, using a heat-labile reverse transcriptase in the presence of a substance exhibiting chaperone function having chaperone function such as saccharides. The method is performed, for example, in the presence of metal ions necessary for activation of the reverse transcriptase and a chelating agent for the metal ions such as a deoxynucleotide triphosphate. The method is capable of reverse transcription over the full length of mRNA template even if the mRNA is a long chain mRNA and, as a result, producing a full length cDNA.
Méthode pour préparer l'ADN complémentaire à partir de l'ARN messager en utilisant une méthode de transcription inverse où la transcription inverse est effectuée à la température à laquelle l'ARN messager ne prend pas une structure secondaire, par exemple à une température de 45 degrés C et plus. La méthode est exécutée, par exemple, en utilisant une transcription inverse fragile à la chaleur en présence d'une substance qui manifeste une fonction de chaperon, telle que les carbohydrates. De plus, la méthode est effectuée, par exemple, en présence d'ions métalliques nécessaires à l'activation de la transcription inverse et d'un agent chélateur pour les ions métalliques, tel que le désoxyribonucléoside triphosphate. La méthode permet de faire une transcription inverse comparativement à la pleine longueur de l'ARN messager, même si ce dernier est une longue chaîne d'ARN messagers. Par conséquent, cela produit un ADN de pleine longueur.
Dennison Associates
Hayashizaki Yoshihide
Kabushiki Kaisha Dnaform
The Institute Of Physical And Chemical Research
LandOfFree
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