C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 7/00 (2006.01)
Patent
CA 2528002
Methods for producing infectious, non-segmented, negative-stranded RNA viruses of the Order Mononegavirales are provided that involve coexpression of a viral cDNA along with essential viral proteins, N, P, and L in a host cell transiently transfected with an expression vector encoding an RNA polymerase. In alternate methods, after the host cell is transfected with a viral cDNA expression vector and one or more vectors encoding the RNA polymerase, N protein, P protein, and L protein, the host cell is exposed to an effective heat shock under conditions sufficient to increase recovery of the recombinant virus. In other alternate embodiments, the host cells are transferred after viral rescue begins into co-culture with a plaque expansion cell, typically a monolayer of expansion cells, and the assembled infectious, non-segmented, negative-stranded RNA virus is recovered from the co-culture. Also provided within the invention are compositions for producing infectious, non-segmented, negative-stranded RNA virus of the Order Mononegavirales, recombinant viruses produced using the foregoing methods and compositions, and immunogenic compositions and methods employing the recombinant viruses. In additional embodiments, the methods and compositions of the invention are employed to produce growth- or replication-defective non-segmented negative-stranded RNA viruses and subviral particles.
L'invention concerne des procédés destinés à la production de virus infectieux à ARN de polarité négative non segmenté de l'ordre des Mononegavirales, impliquant une coexpression d'un ADNc viral et de protéines virales essentielles, telles que N, P et L dans une cellule hôte transfectée de façon transitoire par un vecteur d'expression codant pour une ARN polymérase. Dans d'autres procédés, après que la cellule hôte a été transfectée par un vecteur d'expression ADNc viral et au moins un vecteur codant pour l'ARN polymérase, les protéines N, P et L, la cellule hôte est exposée à un choc thermique efficace dans des conditions suffisantes pour augmenter la récupération du virus recombiné. Dans d'autres modes de réalisation, les cellules hôtes sont transférées après le début du sauvetage viral en co-culture avec une cellule d'expansion à plaque, en général une couche simple de cellules d'expansion, et le virus infectieux à ARN de polarité négative non segmenté, assemblé, est récupéré à partir de la co-culture. L'invention concerne également des compositions permettant de produire des virus infectieux à ARN de polarité négative non segmenté de l'ordre des Mononegavirales, des virus recombinés produits à l'aide desdits procédés et desdites compositions, ainsi que des compositions et des procédés immunogènes utilisant ces virus recombinés. Dans d'autres modes de réalisation, les procédés et les compositions de l'invention sont utilisés pour produire des virus à ARN de polarité négative non segmenté présentant un défaut de croissance ou de réplication et des particules sous-virales.
Parks Christopher L.
Sidhu Mohinderjit S.
Udem Stephen A.
Torys Llp
Wyeth
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1777150