G - Physics – 01 – N
Patent
G - Physics
01
N
G01N 33/53 (2006.01)
Patent
CA 2525250
The present invention provides a method for identifying a plurality of pairs of interacting proteins and plasmids for use in the method. The pair of plasmids is adapted for use in a modified two hybrid system wherein wherein each plasmid comprises a recombinase recognition site. The method comprises the steps of providing cDNAs encoding test polypeptides, inserting the cDNAs into the first and second plasmids, recombining the first and second plasmids to obtain recombined plasmids, isolating and digesting the recombined plasmids, ligating the restriction fragments to a universal adapter to provide a pool of digested fragments flanked by a universal adapter, selecting and amplifying desired sequences, forming concatamers from the amplified sequences, and sequencing the concatamers to determine the nucleotide sequences encoding a plurality of pairs of interacting proteins.
L'invention concerne une méthode pour identifier une pluralité de paires de plasmides et de protéines d'interaction à utiliser dans cette méthode. La paire de plasmides est appropriée à une utilisation dans un système à deux hybrides modifiés, dans lequel chaque plasmide comprend un site de reconnaissance de recombinase. Cette méthode comprend les étapes consistant à fournir des ADNc codant des polypeptides de test, à insérer ces ADNc dans le premier plasmide et dans le second plasmide, à recombiner le premier plasmide et le second plasmide pour obtenir des plasmides recombinés, à isoler et à digérer les plasmides recombinés, à ligaturer les fragments de restriction à un adaptateur universel pour obtenir un ensemble de fragments digérés flanqués d'un adaptateur universel, à sélectionner et à amplifier des séquences voulues, à former des concatamères à partir des séquences amplifiées, et à séquencer ces concatamères pour déterminer les séquences nucléotidiques codant une pluralité de paires de protéines d'interaction.
Hastie Alexander
Mielnicki Lawrence
Pruitt Steven C.
Edward Valerie G.
Health Research Inc.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1418012