Improvements in the in situ pcr

Details Improvements in the in situ pcr Improvements in the in situ pcr

C - Chemistry, Metallurgy

12

M

C12M 1/40 (2006.01)

Patent

CA 2218875

Improvements to the in situ polymerase chain reaction (PCR), a process of in vitro enzymatic amplification of specific nucleic acid sequences within the cells where they originate, can be achieved by changing the way that the enzymatic reaction is started. Reaction initiation is delayed until the start ofPCR thermal cycling, either by withholding a subset of PCR reagents from the cellular preparation until the preparation has been heated to 50° to 80° C, immediately before thermal cycling is begun, or by adding to the PCR reagents a single-stranded DNA binding protein which blocks reaction at temperatures below about 50°C. If the in situ PCR is performed on cellular preparations already attached to a microscope slide, thermal cycling also is facilitated by use of a thermal cycler sample block or compartment designed optimally to hold the microscope slide and any vapor barrier covering the slide.

Des améliorations peuvent être apportées à la réaction de polymérisation en chaîne (PCR) in situ, qui est un procédé d'amplification enzymatique in vitro de séquences d'acides nucléiques spécifiques dans les cellules où elles sont produites, en changeant la façon de démarrer la réaction enzymatique. L'initiation de la réaction est retardée jusqu'au début du cyclage thermique, soit en retardant l'addition d'un sous-ensemble de réactifs de PCR jusqu'à ce que la préparation cellulaire ait été chauffée à une température variant entre 50 et 80 degrés C, immédiatement avant de commencer le cyclage thermique, soit en ajoutant aux réactifs de PCR une protéine fixant l'ADN monocaténaire qui bloque la réaction à des températures inférieures à environ 50 degrés C. Si la PCR in situ est réalisée sur des préparations cellulaires déjà fixées sur une lame de microscope, le cyclage thermique est également facilité par l'emploi d'un bloc ou compartiment porte-échantillon de cycleur thermique conçu optimalement pour recevoir la lame de microscope et n'importe quelle barrière de vapeur couvrant la lame.

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