C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C07H 21/02 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) C12N 15/00 (2006.01)
Patent
CA 2332510
The present invention provides a method for detecting a target nucleic acid fragment directly from a specimen obtained from a patient by in situ hybridization. The method is comprised of several steps which are performed in the listed order. A sample of the specimen is deposited onto a slide. The sample is fixed onto the slide with fixative, the fixative comprising either methanol-acetic acid at a ratio of from 99:1 to 80:20, or formalin-acetic acid at a ratio of from 99:1 to 80:20. The nucleic acids of the fixed sample are contacted with a probe complex specific for the target nucleic acid fragment, under conditions appropriate for hybridization. Non-hybridized probe complex is rinsed from the sample. The rinsed sample is stained with Evans Blue. The hybridized probe complex is visually detected by microscopy, with the presence of the probe complex being an indication of the presence of the target nucleic acid fragment. The method can be performed with different hybridization buffers, several of which are disclosed. The method of the present invention is useful for detecting pathogens in a specimen. Specific probe complexes are disclosed which are useful for detecting pathogens of the species Babesia. The method is useful in detecting nucleic acids from a wide variety of specimens, including serum, plasma, sputum, urine, cerebral spinal fluids, tissue, breast milk, and insects such as ticks.
La présente invention concerne un procédé permettant de détecter directement un fragment d'acide nucléique cible à partir d'un spécimen prélevé sur un patient par hybridation in situ. Ce procédé consiste dans la séquence d'opérations suivante. Un échantillon de spécimen est déposé sur une plaquette. Cet échantillon est fixé sur la plaquette au moyen d'un fixateur renfermant soit du méthanol-acide acétique, soit du formaldéhyde-acide acétique, dans les deux cas selon un rapport compris entre 99:1 et 80:20. Les acides nucléiques de l'échantillon sont mis en contact avec une sonde complexe spécifique du fragment d'acide nucléique dans des conditions d'hybridation convenables. Le complexe sonde non hybride est séparé de l'échantillon par rinçage. Après rinçage, l'échantillon est coloré au bleu d'Evans. Lorsque le complexe de sonde hybride est détecté visuellement au microscope, cela signifie que l'on se trouve en présence du fragment d'acide nucléique cible. Ce procédé peut être appliqué avec différents tampons d'hybridation, dont plusieurs font l'objet de la présente invention. Le procédé selon l'invention est utile pour la détection d'agents pathogènes de l'espèce Babesia. Il convient pour la détection d'acides nucléiques dans des spécimens nombreux et variés tels que sérum, plasma, crachat, urine, liquide céphalorachidien, tissus, lait maternel et insectes comme les tiques.
Harris Nick S.
Shah Jyotsna S.
Goudreau Gage Dubuc
Igenex Inc.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1991499