C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 9/99 (2006.01) C12Q 1/37 (2006.01) G01N 33/543 (2006.01) G01N 33/577 (2006.01) G01N 33/68 (2006.01)
Patent
CA 2184251
A method of inhibiting proteolytic degradation of a thermally-stable intracellular protein is described. The method involves adding 1 or more denaturing agents to a sample which contains the protease and the protein of interest and heating the resulting solution at a temperature and for period of time sufficient to denature the protease. The method optionally includes a step for lysing the cell if the protein of interest is contained in a cell in order to release said protein. Additionally, a method of determining Mx protein induced by interferon in a blood sample is described. The method involves adding to a blood sample a lysing agent, a denaturing agent, and detergent selected to solubilize Mx protein. The sample containing Mx protein is then heated at a temperature of from about 50 °C to about 60 °C for a period of time of from about 1 minute to about 30 minutes, and the Mx protein in the solution then is determined. Also described is a solution including a synthetic matrix mimicking whole blood cell lysates, or actual whole blood cell lysates, to which a known concentration of a thermally-stable intracellular protein is added to prepare a control material. In addition, a solution free of a protease that degrades the intracellular protein is disclosed, such solution remaining stable at 4 °C for at least three weeks.
L'invention se rapporte à un procédé d'inhibition de la dégradation protéolytique d'une protéine intracellulaire thermiquement stable. Le procédé consiste à ajouter un ou plusieurs agents de dénaturation à un échantillon qui contient la protéase et la protéine, et à chauffer la solution obtenue à une température et sur une durée suffisantes pour dénaturer la protéase. Le procédé comprend éventuellement une étape consistant à lyser la cellule si la protéine étudiée est contenue dans une cellule afin de libérer la protéine. L'invention se rapporte en outre à un procédé de détermination de la protéine Mx induite par l'interféron dans un échantillon de sang. Le procédé consiste à ajouter à un échantillon de sang un agent lytique, un agent de dénaturation et un détergent sélectionné pour solubiliser la protéine Mx. L'échantillon contenant la protéine Mx est ensuite chauffé à une température comprise entre environ 50 DEG C et environ 60 DEG C sur une durée comprise entre environ 1 minute et environ 30 minutes, et la protéine Mx dans la solution est ensuite déterminée. L'invention se rapporte également à une solution comprenant une matrice synthétique imitant des lysats cellulaires de sang total, ou bien comprenant des lysats cellulaires réels de sang total, matrice à laquelle est ajoutée une concentration connue d'une protéine intracellulaire thermiquement stable afin de préparer un matériau témoin. De plus, l'invention se rapporte à une solution exempte d'une protéase qui dégrade la protéine intracellulaire, cette solution restant stable à 4 DEG C pendant au moins trois semaines.
Oh Se-Kyung
Towbin Harry
Ciba Corning Diagnostics Corp.
Corporation Bayer
Sim & Mcburney
LandOfFree
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