C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/10 (2006.01) C07K 14/705 (2006.01) C07K 16/00 (2006.01) C07K 16/28 (2006.01) C07K 16/32 (2006.01) C12N 9/02 (2006.01) C12N 9/38 (2006.01) C12N 15/62 (2006.01) C12N 15/70 (2006.01) C12Q 1/02 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01) G01N 33/50 (2006.01) G01N 33/535 (2006.01) G01N 33/68 (2006.01)
Patent
CA 2374476
Fragment pairs of a Class A .beta.-lactamase (TEM-1 of <i>E. coli</i> are disclosed that depend for their functional reassembly into the parent protein on the interaction of heterologous polypeptides or other molecules which have been genetically or chemically conjugated to the break-point termini of the fragment pairs. In addition, methods are provided for identifying fragment pairs that will optimally reassemble into a functional parent protein. Fragment pairs that comprise molecular interaction-dependent enzymes find use in (1) homogeneous assays and biosensors for any analyte having two or more independent binding sites, (2) tissue-localized activation of therapeutic and imaging reagents <i>in vivo</i> for early detection and treatment of cancer, chronic inflammation, atherosclerosis, amyloidosis, infection, transplant rejection, and other pathologies, (3) cell-based sensors for activation or inhibition of metabolic or signal transduction pathways for high-efficiency, high-throughput screening for agonists/antagonists of the target pathway, (4) high-throughput mapping of pair-wise protein-protein interactions within and between the proteomes of cells, tissues, and pathogenic organisms, (5) rapid selection of antibody fragments or other binding proteins which bind specifically to polypeptides of interest, (6) rapid antigen identification for anti-cell and anti-tissue antibodies, (7) rapid epitope identification for antibodies, (10) cell-based screens for high-throughput selection of inhibitors of any protein-protein interaction.
L'invention concerne des paires de fragments de bêta-lactamase de classe A (TEM-1 de <i>E.coli</i>, dont le réassemblage fonctionnel dans la protéine parente dépend de l'interaction entre des polypeptides hétérologues ou d'autres molécules génétiquement ou chimiquement conjuguées aux terminaisons de rupture desdites paires de fragments. Cette invention concerne également des méthodes permettant d'identifier des paires de fragments destinées à se réassembler de manière optimale dans une protéine parente fonctionnelle. Des paires de fragments renfermant des enzymes dépendantes des interactions moléculaires peuvent être utilisées: 1) dans des essais homogènes et des biocapteurs pour un analyte présentant deux sites de liaison indépendants ou plus; 2) pour une activation tissulaire localisée de réactifs thérapeutiques et d'imagerie <i>in vivo</i> permettant un diagnostic précoce et un traitement du cancer, des inflammations chroniques, de l'athérosclérose, de l'amylose, des infections, du rejet de greffons, et d'autres pathologies; 3) dans des capteurs cellulaires destinés à activer ou à inhiber des voies métaboliques ou de transduction du signal pour permettre un criblage à haute efficacité et rendement élevé d'agonistes/antagonistes de la voie cible; 4) pour une cartographie à rendement élevé d'interactions protéine-protéine par paires, à l'intérieur des protéomes de cellules, tissus, et d'organismes pathogènes, ou entre ces protéomes; 5) pour une sélection rapide de fragments d'anticorps ou d'autres protéines de liaison qui se lient spécifiquement à des polypeptides recherchés; 6) pour une identification antigénique rapide d'anticorps anti-cellulaires et anti-tissulaires; 7) pour une identification épitopique rapide d'anticorps; et enfin 10) dans des essais cellulaires pour une sélection à rendement élevé d'inhibiteurs de toute interaction protéine-protéine.
Balint Robert F.
Her Jeng-Horng
Kalobios Inc.
Ogilvy Renault Llp/s.e.n.c.r.l.,s.r.l.
Panorama Research Inc.
LandOfFree
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