Isolation and characterization of plant regulatory sequences

Details Isolation and characterization of plant regulatory sequences Isolation and characterization of plant regulatory sequences

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 15/82 (2006.01) A01H 5/00 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 9/22 (2006.01) C12N 15/29 (2006.01) A01N 65/00 (2006.01)

Patent

CA 2311571

In the search for plant regulatory sequences capable of driving nematode- triggered effector gene expression in feeding structures the promoter tagging appears to be a valuable tool. A large collection of transgenic Arabidopsis thaliana(L.) plants was generated. They were transformed with a .beta.- glucuronidase gene functioning as a promoter tag. Two T-DNA constructs, pGV1047 and p.DELTA.gusBin19 were used. Early responses to nematode invasion were of primary interest. Four lines exhibiting GUS activity in syncytia induced by the beet cyst nematode were studied. Reporter gene activation was also identified in galls induced by root knot and ectoparasitic nematodes. Time course studies revealed that the four tags were differentially activated during the development of the feeding structure. T-DNA-flanking regions responsible for the observed responses after nematode infection were isolated and characterized for promoter activity.

Dans la recherche de séquences régulatrices de plantes capables d'entraîner l'expression du gène effecteur déclenchée par les nématodes dans les structures d'alimentation, le marquage par promoteurs semble être un outil précieux. Un grand nombre de plantes transgéniques Arabidopsis thaliana (L.) a été généré. Elles ont été transformées par un gène de .beta.-glucuronidase fonctionnant comme marqueur de promoteur. Deux produits de reconstruction d'ADN-T, pGV1047 et p.DELTA.gusBin19 ont été utilisés. Les réponses précoces à l'invasion par les nématodes ont été trés interessantes. Quatre lignées présentant une activité GUS dans les syncytia induite par les nématodes à kystes de la betterave ont été étudiées. L'activation du gène reporter a également été identifiée dans les galles induites par les nématodes ectoparasites et des neudosités des racines. Des études ont montré que les quatre marqueurs étaient activés de manière différentielle pendant le développement de la structure d'alimentation. Des zones adjacentes ADN-T responsables des réponses observées après la nématodose ont été isolées et caractérisées pour l'activité du promoteur.

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