C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C07H 19/00 (2006.01) C07H 19/10 (2006.01) C07H 19/20 (2006.01) C07H 21/00 (2006.01) C07H 21/02 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01)
Patent
CA 2457513
The present invention describes new compositions of matter in the form of labeled nucleoside polyphosphates with four or more phosphates. In addition compositions of nucleoside polyphosphates with four or more phosphates that are substrates for nucleic acid polymerases with enhanced substrate properties and methods of using these nucleoside polyphosphates for nucleic acid detection, characterization and quantification are described. The compositions provided by this invention include nucleoside polyphosphate, dideoxynucleoside polyphosphate, or deoxynucleoside polyphosphate analogues which have colorimetric, chemiluminescent, or fluorescent moieties, mass tags or an electrochemical tags attached to the terminal-phosphate. When a nucleic acid polymerase uses this analogue as a substrate, an enzyme-activatable label would be present on the inorganic polyphosphate by-product of phosphoryl transfer. Cleavage of the polyphosphate product of phosphoryl transfer via phosphatase leads to a detectable change in the label attached thereon. When the polymerase assay is performed in the presence of a phosphatase, there is provided a convenient method for real-time monitoring of DNA or RNA synthesis and detection of a target nucleic acid.
La présente invention concerne de nouvelles compositions de matière sous forme de polyphosphates de nucléoside marqués comprenant quatre ou plusieurs autres phosphates. L'invention concerne également des compositions de polyphosphates de nucléoside comprenant quatre ou plusieurs autres phosphates utilisés en tant que substrats de polymérases d'acide nucléique et présentant des propriétés de substrat améliorées, ainsi que des méthodes d'utilisation de ces polyphosphates de nucléoside dans la détection, la caractérisation et la quantification d'acides nucléiques. Les compositions de l'invention comprennent des analogues de polyphosphate de nucléoside, de polyphosphate de didéoxynucléoside ou de polyphosphate de déoxynucléoside présentant des fragments colorimétriques, chimiluminescents ou fluorescents, des marqueurs de masse ou des marqueurs électrochimiques rattachés au phosphate de terminaison. Lorsqu'une polymérase d'acide nucléique utilise cet analogue en tant que substrat, un marqueur activable par une enzyme est présent sur le produit dérivé de polyphosphate inorganique du transfert de phosphoryle. Le clivage du produit de polyphosphate de transfert de phosphoryle via la phosphatase génère un changement pouvant être détecté dans le marqueur rattaché. L'invention concerne également une méthode de surveillance en temps réel de la synthèse d'ADN ou d'ARN et de détection d'un acide nucléique cible, utilisée lorsque l'analyse de la polymérase s'effectue en présence d'une phosphatase.
Kumar Shiv
Sood Anup
Amersham Biosciences Corp
Fetherstonhaugh & Co.
Ge Healthcare Bio-Sciences Corp.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1435720