Labelling and selection of molecules

Details Labelling and selection of molecules Labelling and selection of molecules

C - Chemistry, Metallurgy

07

K

C07K 1/13 (2006.01) C07K 1/22 (2006.01) C07K 1/36 (2006.01) C07K 14/52 (2006.01) C07K 16/00 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12P 21/02 (2006.01) G01N 33/532 (2006.01) G01N 33/535 (2006.01) G01N 33/554 (2006.01)

Patent

CA 2259421

A method of labelling molecules which includes providing in a common medium a label molecule, a marker ligand able to bind a member of a specific bind-ing pair, such as an antigen, a sbp mem-ber, an enzyme able to catalyse binding of the label molecule to other molecules, the enzyme being associated with the marker ligand; causing or allowing binding of the marker ligand to the sbp member, and causing or allowing binding of the label molecule to other molecules in the vicin-ity of the marker ligand bound to the sbp member. The marker ligand may be an antibody or any specific binding molecule, such as a chemokine or cytokine. A com-plementary member of the specific bind-ing pair may be included, e.g. an an-tibody, or a diverse population of such sbp members, e.g. antibodies, may be included within which those which bind the counterpart sbp member, e.g. antigen, may be labelled and subsequently isolated for manipulation and/or use. Suitable la-bels include biotin-tyramine with signal transfer being catalysed by hydrogen per-oxidase. Cells, virus particles and other moieties may be labelled, for identifica-tion or obtention of proteins which inter-act or are in close proximity with a particular sbp member, or of cells of interest, or for enhancement of labelling, e.g. for cell sorting.

Méthode de marquage de molécules consistant à prévoir dans un milieu ordinaire une molécule de marquage, un ligand de marquage capable de fixer un membre d'un paire de liaison spécifique (pls) tel un antigène, un membre d'une pls, une enzyme capable de catalyser la liaison de la molécule de marquage avec d'autres molécules, cette enzyme étant associée au ligand de marquage; à provoquer ou à laisser se produire la liaison du ligand de marquage avec le membre de la pls, et à provoquer ou laisser se produire la liaison de la molécule de marquage avec d'autres molécules dans la région du ligand de marquage lié au membre de l pls. Le ligand de marquage peut être un anticorps ou n'importe quelle molécule de liaison spécifique, telle une chemokine ou une cytokine. Un membre complémentaire de la pls peut être ajouté, p. ex. un anticorps, ou une population différente de tels membres de pls, p. ex. des anticorps, peut être incluse dans les éléments qui fixent le membre complémentaire de la pls, p. ex. un antigène, ce membre ou cette population pouvant être marqué puis isolé pour être manipulé et/ou utilisé. Les marqueurs adéquats comprennent notamment la biotine-tyramine, le transfert de signal étant catalysé par la peroxidase d'hydrogène. Le marquage des cellules, particules virales et autres fractions peut servir à identifier ou à obtenir des protéines qui interagissent ou sont très proches d'un membre particulier d'une pls, ou des cellules spécifiques ou à renforcer le marquage, p. ex. pour la sélection de cellules.

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