C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C07H 21/00 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01)
Patent
CA 2160784
The present invention involves methods of improving the Ligase Chain Reaction (LCRTM) amplification schemes by modifying at least one probe end so that the probability of the probe contributed to spurious ligation and signal development is greatly reduced. Only after specific hybridization of the modified probe with true target are the modified ends "corrected" by endonuclease IV in a target dependent fashion to allow participation of the probe in the enzymatic ligation reaction. Specific modifications include 3' phosphate blocking groups and nucleic acid overhangs containing an abasic site at the point of ligation. Further embodiments include probes modified to contain ribonucleotide moieties which, after amplification, can be cleaved by RNase to destroy the amplification products and reduce the risk of contamination.
La présente invention se rapporte à des procédés permettant d'améliorer les techniques d'amplification par Réaction en Chaîne de Ligase (LCRMD), et qui consistent à modifier au moins une extrémité d'une sonde de façon à réduire la probabilité que la sonde va entraîner une fausse ligature et un faux développement de signaux. Les extrémités modifiées ne sont "corrigées" par l'endonucléase IV, de manière dirigée par rapport à la cible, et afin de permettre la participation de la sonde dans la réaction de ligature enzymatique, qu'après qu'une hybridation spécifique de la sonde modifiée avec la vraie cible a eu lieu. Des modifications spécifiques comprennent des groupes bloquants 3' phosphatés et des acides nucléiques en surplomb contenant un site non basique au niveau du point de ligature. D'autres modes de réalisation comprennent des sondes modifiées de façon à contenir des fractions ribonucléotidiques qui, après l'amplification, peuvent être segmentées par RNase afin de détruire les produits d'amplification et de réduire les risques de contamination.
Backman Keith C.
Carrino John J.
Shimer George H.
Yocum Robert R.
Abbott Laboratories
Ogilvy Renault Llp/s.e.n.c.r.l.,s.r.l.
LandOfFree
Ligase chain reaction with endonuclease iv correction and... does not yet have a rating. At this time, there are no reviews or comments for this patent.
If you have personal experience with Ligase chain reaction with endonuclease iv correction and..., we encourage you to share that experience with our LandOfFree.com community. Your opinion is very important and Ligase chain reaction with endonuclease iv correction and... will most certainly appreciate the feedback.
Profile ID: LFCA-PAI-O-2066191