C - Chemistry – Metallurgy – 07 – K
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
07
K
C07K 1/04 (2006.01) A61K 49/00 (2006.01) A61K 49/08 (2006.01) A61K 51/08 (2006.01) C07C 229/16 (2006.01) C07K 1/02 (2006.01) C07K 14/11 (2006.01) C07K 14/16 (2006.01) C07K 14/215 (2006.01) C07K 14/36 (2006.01) C07K 14/435 (2006.01) C07K 14/54 (2006.01) C07K 14/705 (2006.01) G01N 33/68 (2006.01)
Patent
CA 2351547
The present invention relates to methods and compositions for lipid matrix- assisted chemical ligation and synthesis of membrane polypeptides that are incorporated in a lipid matrix. The invention is exemplified in production of a prefolded membrane polypeptide embedded within a lipid matrix via stepwise chemoselective chemical ligation of unprotected peptide segments, where at least one peptide segment is embedded in a lipid matrix. Any chemoselective reaction chemistry amenable for ligation of unprotected peptide segments can be employed. Suitable lipid matrices include liposomes, micelles, cell membrane patches and optically isotropic cubic lipidic phase matrices. Prefolded synthetic and semi-synthetic membrane polypeptides synthesized according to the methods and compositions of the invention also permit site- specific incorporation of one or more detectable moieties, such as a chromophore, which can be conveniently introduced during synthesis. The methods and compositions of the invention have multiple uses. For example, they can be used to assay ligand binding to membrane polypeptides and domains comprising a receptor, and thus are extremely useful for structure/function studies, drug screening/selection/design, and diagnostics and the like, including high-throughput applications. The methods and compositions of the invention are particularly suited for FRET analyses of previously inaccessible membrane polypeptides.
La présente invention concerne des méthodes et compositions de ligature chimique assistée par une matrice lipidique et de synthèse de polypeptides membranaires intégrés dans une matrice lipidique. Dans un exemple selon l'invention on produit un polypeptide membranaire préalablement plié et incorporé dans une matrice lipidique au moyen d'une ligature chimique chimiosélective progressive de segments peptidiques non protégés, au moins un segment peptidique étant incorporé dans une matrice lipidique. On peut utiliser n'importe quel procédé de réaction chimiosélective indiqué pour une ligature de segments peptidiques non protégés. Des matrices lipidiques appropriées comprennent des liposomes, des micelles, des timbres de membranes cellulaires et des matrices à phases lipidiques cubiques optiquement isotropiques. Des polypeptides membranaires préalablement pliés, synthétiques et semi-synthétiques, obtenus par synthèse selon les méthodes et compositions de la présente invention permettent aussi une incorporation spécifique au site d'un ou de plusieurs groupes fonctionnels détectables, tels qu'un chromophore, qu'on peut aisément introduire pendant la synthèse. Les méthodes et compositions selon l'invention ont des usages multiples. Par exemple, on peut les utiliser pour mesurer la liaison d'un ligand à des polypeptides membranaires et à des domaines comprenant un récepteur, et ils sont donc extrêmement utiles pour étudier la structure/fonction, pour cribler/sélectionner/concevoir des médicaments, pour établir des diagnostics et analogues, y compris pour des applications à haut rendement. Les méthodes et compositions selon la présente invention sont particulièrement indiquées pour des analyses par transfert d'énergie de résonance par fluorescence de polypeptides membranaires antérieurement inaccessibles.
Botti Paolo
Hunter Christie L.
Kent Stephen B. H.
Kochendoerfer Gerd G.
Gowling Lafleur Henderson Llp
Gryphon Sciences
LandOfFree
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