C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 5/08 (2006.01) C12N 5/06 (2006.01) A61K 48/00 (2006.01)
Patent
CA 2222882
Long term culture of resting T lymphocytes. The present invention provides methods and compositions for maintaining resting, mature T lymphocytes (cells) for long term in the absence of mitogens, antigens, or stimulatory cytokines, in which the T cells maintain their ability to respond to mitogens and allogeneic cells. T cells cultured under such conditions can be used as target cells for retroviral vector-mediated gene transfer and implemented in certain gene therapy applications. The culturing conditions described herein allow for the continuous availability of T lymphocytes for various pharmacological, diagnostic, gene therapy, and experimental purposes, and can be utilized for any application requiring non-stimulated T lymphocytes. In specific examples, umbilical cord blood and peripheral blood T lymphocytes and endothelial-like adherent monocytes are cultured in DMEM, 2 % 2-mercaptoethanol containing either 20 % horse serum, or RPMI 2 % 2-ME containing 10 % fetal calf serum supplemented with basic fibroblast growth factor for up to three months.
L'invention concerne la culture à long terme de lymphocytes quiescents. Elle décrit des procédés et des compositions pour conserver à long terme des lymphocytes T (cellules) quiescents matures en l'absence de mitogènes, d'antigènes, ou de cytokines stimulantes, les cellules T conservant leur capacité de réaction aux mitogènes et aux cellules allogéniques. Les cellules T cultivées dans de telles conditions peuvent s'utiliser comme cellules cibles pour le transfert génique régulé par vecteur rétroviral et être mises en oeuvre dans certaines thérapies géniques. Les conditions de mise en culture décrites permettent la disponibilité en continu des lymphocytes T pour diverses applications pharmacologiques, diagnostiques, de thérapies géniques, et expérimentales, et peuvent être utilisées pour toutes applications nécessitant des lymphocytes T non stimulés. Dans des exemples spécifiques, des lymphocytes T de sang cordonal et de sang périphérique, ainsi que des monocytes adhérents de type endothélial sont mis en culture dans un milieu DMEM avec 2 % de 2-mercaptoéthanol contenant 20 % de sérum de cheval, ou bien dans un milieu RPMI avec 2 % de 2-ME contenant 10 % de sérum embryonnaire de veau complété avec du facteur de croissance du fibroblaste basique, pendant une durée atteignant trois mois.
Dougherty Joseph
Ron Yacov
Ogilvy Renault Llp/s.e.n.c.r.l.,s.r.l.
The University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1791160