Look-through mutagenesis for developing altered polypeptides...

C - Chemistry – Metallurgy – 07 – H

Patent

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C07H 21/02 (2006.01) C07K 16/00 (2006.01)

Patent

CA 2572917

A method of mutagenesis by which a predetermined amino acid is introduced into each and every position of a selected set of positions in a preselected region (or several different regions) of a polypeptide to produce a library of polypeptide analogs is disclosed. The method is based on the premise that certain amino acids play a crucial role in the structure and function of proteins and thus is capable of identifying and distinguishing functional amino acid residues ("hot spots") from non-functional amino acids residues ("cold spots") within a polypeptide or portion thereof. Libraries can be generated which contain only desired polypeptide analogs and are of reasonable size for screening. The libraries can be used to study the role of specific amino acids in polypeptide structure and function and to develop new or improved polypeptides such as antibodies, antibody fragments, single chain antibodies, enzymes, and ligands.

L'invention concerne une méthode de mutagenèse consistant à introduire un acide aminé prédéterminé dans chaque position d'un ensemble sélectionné de positions dans une région présélectionnée (ou plusieurs régions différentes) d'un polypeptide en vue de la production d'une bibliothèque d'analogues polypeptidiques. Cette méthode part du principe que certains acides aminés jouent un rôle crucial dans la structure et la fonction de protéines, et permet donc d'identifier et de différencier des résidus d'acides aminés fonctionnels ("points chauds") par rapport à des résidus d'acides aminés non fonctionnels ("points froids") dans un polypeptide ou une partie de celui-ci. Des bibliothèques peuvent être générées, ces bibliothèques ne contenant que des analogues polypeptidiques souhaités et présentant une taille appropriée pour un criblage. Lesdites bibliothèques peuvent être utilisées pour étudier le rôle d'acides aminés spécifiques dans la structure et la fonction des polypeptides et pour produire de nouveaux polypeptides améliorés tels que des anticorps, des fragments d'anticorps, des anticorps monocaténaires, des enzymes et des ligands.

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