C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 1/21 (2006.01) C07K 14/475 (2006.01)
Patent
CA 2589716
A low cell density fermentation process for the production of heterologous proteins in microorganisms. The cell culture obtained by cultivating host microorganisms transformed with a vector carrying genetic material for the said proteins and an inducible promoter under batch fermentation conditions is fed with a feed medium after an OD600 of 0.16 to 8 has been achieved or after 0 to 4 hrs from the start of the fermentation process. The feed medium comprises 5 to 30% of carbon source and 1 to 30% of nitrogen source and 0 mg to 400 mg antibiotics and 2.5 to 4.25% inorganic phosphates and trace elements. The concentration of the carbon source in the feed medium is 10 to 30 and the amino acid content in nitrogen source is 45 to 95%. The initial feed rate is in the range of 0 ml/hr to 12 ml/hr and is raised exponentially by an exponent in the range of 0.1 to 0.4 and/or linearly with the slope of the curve in the range of 0.5 to 3. The production of the heterologous proteins is induced with 0.01 - 4% inducer at a cell density of OD600 0.1 - OD600 50. The feeding of the cell culture with the feed medium and the feed rate described above is continued after production has been induced. The pO2 is adjusted between 10% to 60% by passing sterile air into the fermentation broth and the temperature and pH of the fermentation broth are maintained at 33~C - 41~C and 6.9 - 8.5, respectively during the entire fermentation.
Procédé de fermentation à faible densité cellulaire destiné à la production de protéines hétérologues dans des microorganismes. La culture de cellules obtenue en cultivant des microorganismes hôtes transformés par un vecteur portant le matériel génétique pour lesdites protéines et un promoteur inductible dans des conditions de fermentation discontinue reçoit un milieu d'alimentation après qu'une DO600 comprise entre 0,16 et 8 a été atteinte ou de 0 à 4 h après le début de la fermentation. Le milieu d'alimentation comprend de 5 à 30 % d'une source de carbone, de 1 à 30 % d'une source d'azote, de 0 à 400 mg d'antibiotiques, de 2,5 à 4,25 % de phosphates inorganiques et des oligo-éléments. La concentration de la source de carbone dans le milieu d'alimentation est de 10 à 30 et la teneur en acides aminés dans la source d'azote est de 45 à 95 %. Le débit d'alimentation initial est compris entre 0 et 12 ml/h et on l'augmente exponentiellement selon un exposant compris entre 0,1 et 0,4 et/ou linéairement selon une courbe dont la pente est comprise entre 0,5 et 3. La production des protéines hétérologues est déclenchée par un inducteur à 0,01-4 % à une densité cellulaire dont la DO600 est comprise entre 0,1 et 50. On continue d'alimenter la culture de cellules avec le milieu d'alimentation et au débit d'alimentation décrits ci-dessus après que la production a été induite. On règle la pO2 entre 10 et 60 % en faisant passer de l'air stérile dans le bouillon de fermentation, et la température et le pH du bouillon de fermentation sontmaintenus respectivement entre 33 et 41°C et entre 6,9 et 8,5 pendant toute la durée de la fermentation.
Borbhuiya Monsur Ahmed
Maiti Dipanwita
Mishra Shrikant
Nazareth Genevieve Suzie
Niphadkar Milind Prabhakar
Smart & Biggar
Usv Limited
LandOfFree
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