Magnetic enrichment of circulating cells, fragments and...

G - Physics – 01 – N

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G01N 33/574 (2006.01) B03C 1/00 (2006.01) C07K 16/00 (2006.01) G01N 33/566 (2006.01) G01N 33/567 (2006.01)

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CA 2587765

The methods and reagents described in this invention are used to analyze circulating tumor cells, clusters, fragments, and debris. Analysis is performed with a number of platforms, including flow cytometry, CellSpotterTM fluorescent microscopy imaging andmass spectrometric profiling. In addition to analyzing and enumerating morphologicaly classified cells by imaging, the presence of damaged cells and derived debris in magnetically enriched specimens has been shown to be an important ~smoking gun~ indicator of demised tumor cells. Described herein are improved methods to screen, diagnose and monitor disease based on intact circulating rare cells and associated fragments or debris. The present invention incorporates proteomic and genomic profiling of cellular debris in cancer cell analysis, either complementary to or independent of image cytometry. The technology provides diagnosis and prognostic tools in diseases such as cancer that incorporate not only detection and quantitation of intact circulating cells but also of cellular fragments and debris that bear generic cytoskeletal and/or tumor-specific markers. The presence of such markers reflects immune function in early disease and/or therapeutic effectiveness in later stages.

Les procédés et les réactifs décrits dans la présente invention permettent d~analyser les cellules tumorales en circulation, les grappes, les fragments et les débris. L~analyse est réalisée avec un certain nombre de plates-formes, y compris une cytométrie d~écoulement, l~imagerie par microscopie fluorescente CellSpotterTM et le profilage spectrométrique de masse. Outre l~analyse et l~énumération de cellules classées morphologiquement par imagerie, la présence des cellules endommagées et des débris dérivés dans des spécimens enrichis magnétiquement s~est révélée un indicateur important ~ pistolet fumant ~ de cellules tumorales tuées. L~invention décrit des procédés améliorés pour cribler, diagnostiquer et surveiller les maladies sur la base de cellules rares intactes en circulation et de fragments ou débris associés. La présente invention incorpore le profilage protéomique et génomique de débris cellulaires dans l~analyse des cellules cancéreuses, soit de manière complémentaire à ou indépendante de la cytométrie d~image. La technologie fournit des outils de diagnostic et de pronostic dans les maladies comme le cancer intégrant non seulement la détection et la quantification des cellules intactes en circulation mais également des fragments et débris cellulaires portant des marqueurs cytosquelettiques génériques et/ou spécifiques aux tumeurs. La présence de tels marqueurs reflète la fonction immunitaire au début de la maladie et/ou l~efficacité thérapeutique à des stades ultérieurs.

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