Mammalian cell expression vectors and utilization

Details Mammalian cell expression vectors and utilization Mammalian cell expression vectors and utilization

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 15/85 (2006.01) C12N 15/65 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)

Patent

CA 2726862

An improved mammalian expression vector system which allows: (1) highly expressing exogenous proteins in host mammalian cells; (2) rapidly and efficiently screening recombinant stable cell lines expressing the gene of interest; (3) maintain sustainable expression and prevent gene silencing; and (4) effectively secreting proteins into media in some of cases. The entire expression vector system includes optimized promoters and core promoters, the use of special internal ribosome entry sites, integration of the bacterial backbone into the mammalian expression unit, multiple choices of selection markers, artificial matrix attachment region elements, effective secreting lead sequences and their 5' and 3' UTRs, and proper combinations of these expression elements.

L'invention porte sur un système vecteur d'expression de mammifère amélioré qui permet : (1) l'expression élevée de protéines exogènes dans des cellules de mammifère hôtes ; (2) le criblage rapide et efficace de lignées cellulaires recombinées stables exprimant le gène d'intérêt ; (3) le maintien d'une expression durable et l'inhibition de linactivation génique, et (4) la sécrétion efficace de protéines dans des milieux dans certains des cas. Le système vecteur d'expression entier comprend des promoteurs optimisés et des promoteurs de noyau, l'utilisation de sites d'entrée interne des ribosomes spécifiques, l'intégration du squelette bactérien dans l'unité d'expression de mammifère, de multiples choix de marqueurs de sélection, des éléments de région de fixation à la matrice artificiels, des séquences de tête sécrétrices efficaces et leurs 5'- et 3'-UTR et des combinaisons appropriées de ces éléments d'expression.

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