C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/12 (2006.01) A61K 35/28 (2006.01) A61K 38/37 (2006.01) A61K 48/00 (2006.01) C12N 5/06 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 15/867 (2006.01)
Patent
CA 2289918
The present invention relates to a method for the ex vivo transduction of mammalian cells, in particular to the transduction of bone marrow stromal cells. These cells can be transduced with a gene of interest, in particular a B-domain deleted human factor VIII gene. In the latter case, the transduced cells can be used to treat hemophilia A. The method for the ex vivo transduction of bone marrow stromal cells with the human factor VIII gene comprises provision of an intron-based retroviral vector comprising a B-domain deleted human factor VIII cDNA (designated as MFG-FVIII.DELTA.B); pseudotyping the said vector with the Gibbon ape leukemia virus (GALV) envelope; transducing bone marrow stromal cells with the said pseudotyped vector by pre- incubating the cells for a suitable period of time in cell culture medium without phosphate and subsequently adding a vector-containing supernatant, optionally supplemented with transduction additives to the cells, followed by centrifuging the mixture thus obtained; and optionally repeating the two previous steps.
La présente invention concerne un procédé pour la transduction ex vivo de cellules de mammifères, en particulier, pour la transduction de cellules du stroma de la moelle osseuse. Ces cellules peuvent être transduites avec un gène interessant, en particulier le gène du facteur VIII de l'homme supprimé du domaine B. Dans ce dernier cas, les cellules transduites peuvent permettre de traiter l'hémophilie A. Le procédé pour la transduction ex vivo des cellules du stroma de la moelle osseuse avec le gène du facteur VIII de l'homme consiste à prévoir un vecteur rétroviral à base d'intron, comprenant un ADNc du facteur VIII de l'homme supprimé du domaine B (désigné par MFG-FVIII.DELTA.B); à pseudotyper ce vector avec l'enveloppe du virus (GALV) de la leucémie du singe Gibbon; à transduire les cellules du stroma de la moelle osseuse avec ce vecteur pseudotypé en pré-incubant les cellules pendant un laps de temps approprié dans un milieu de culture cellulaire sans phosphate. Ce procédé consiste à ajouter ensuite un surnageant contenant un vecteur, éventuellement complété par des additifs de transduction des cellules avant de centrifuger le mélange ainsi obtenu, puis à répéter éventuellement les deux étapes précédentes.
Chuah Marinee Khim Lay
Vanden Driessche Thierry
Fetherstonhaugh & Co.
Leuven Research & Development Vzw
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1670005